Coloração com vermelho do Nilo de C. elegans: um método para visualizar gotículas lipídicas em animais fixos

- Ao visualizar gotículas lipídicas, as organelas de armazenamento intracelular para lipídios neutros, começam adicionando uma solução detergente, como uma contendo Triton X-100, à amostra. Isso permeabilizará as células do verme. Em seguida, fixe a amostra na concentração apropriada de isopropanol, por exemplo, 40%.

Em seguida, adicione Nile Red à amostra e proteja-a da luz, pois o corante é sensível à luz. A fixação permite que o corante acesse gotículas lipídicas em todo o animal. O vermelho do Nilo é um corante lipofílico cujo espectro de emissão de fluorescência depende da polaridade do ambiente lipídico local.

Quando exposto a lipídios polares, como fosfolipídios, o espectro de emissão do Vermelho do Nilo está nos comprimentos de onda vermelhos mais altos. Quando exposto a lipídios neutros, como triacilgliceróis e ésteres de esteróis no núcleo neutro das gotículas lipídicas, o espectro de emissão do Vermelho do Nilo muda para os comprimentos de onda amarelo-ouro mais baixos.

Portanto, use o canal verde de um microscópio fluorescente, que coletará as emissões de comprimento de onda amarelo-ouro, para visualizar a coloração de gotículas lipídicas em todo o animal. No protocolo