Dissociação de célula única de Caenorhabditis elegans: um método para isolar células vivas

- Comece com vermes peletizados lavados e adicione tampão de lise contendo SDS, um detergente, e DTT, um agente redutor. Isso quebra a cutícula protetora do verme, expondo o corpo à dissociação celular. Evite a exposição prolongada ao tampão de lise para minimizar a lise e a morte celular.

Em seguida, remova os reagentes de lise com várias lavagens de tampão de isolamento a frio. É importante que esse tampão tenha a osmolaridade correta para evitar a morte celular. Use uma enzima protease para quebrar as conexões célula a célula. Ajude o processo de homogeneização junto com a energia mecânica, pipetando a mistura contra a parede do tubo.

Adicione meios contendo soro para interromper a reação enzimática e antibióticos para evitar contaminação. Pellet e lave a amostra várias vezes para remover a maioria dos detritos.

Finalmente, coloque o tubo no gelo para permitir a sedimentação por gravidade. Os detritos, incluindo restos da cutícula ou aglomerados de células, se depositam, enquanto as células dissociadas permanecem suspensas na camada superior do meio. Essas células podem ser usadas para cultura de curto prazo ou para isolar populações de células específicas por FACS ou imunopreci