drosófila Ensaio de agressão: um método para testar a plasticidade comportamental em moscas
Transcript
- Para avaliar a agressão em moscas, use uma câmara de combate fechada equipada com dois pontos de entrada e uma divisória para manter os indivíduos separados antes do teste. Coloque uma fonte de alimento no centro da câmara para criar conflito para as moscas. Em seguida, carregue machos previamente isolados e marcados através dos pontos de entrada em ambos os lados da arena. Remova o divisor e registre os encontros das moscas para quantificar a agressão.
Para estabelecer o domínio, um macho exibe comportamentos ofensivos estereotipados que aumentam de intensidade, desde se aproximar e perseguir o oponente até atacar, um comportamento que indica agressão, onde a mosca atacante se levanta nas patas traseiras e se agarra ao oponente na tentativa de agarrá-lo. Em contraste, o oponente exibe comportamentos defensivos, como fugir em retirada do atacante. Assim, um perdedor e um vencedor emergem da luta, e uma memória de derrota ou vitória é formada em cada oponente.
No protocolo de exemplo, veremos como uma configuração que elimina o manuseio de animais durante o ensaio de agressão é usada para estudar a formação de memória em moscas que perderam sua primeira luta, denominado efeito "perdedor".
- Comece experimentos comportamentais inserindo divisórias de plástico em cada câmara de combate. Remova o plugue de algodão do tubo de isolamento e posicione o tubo abaixo de um orifício aberto na lateral do aparelho. Permita que a mosca entre na câmara de combate por geotaxia negativa. Em seguida, feche a parede deslizante depois que a mosca entrar na câmara. Repita o procedimento para introduzir a segunda mosca na câmara de combate do outro lado do aparelho.
Em seguida, coloque o aparelho de volta na posição de gravação de vídeo iluminada. Comece a gravação de vídeo e remova a divisória de plástico para permitir que as moscas interajam. Para experimentos de efeito "perdedor", registre as primeiras lutas por 20 minutos para garantir a formação de fortes relações de dominância. Após 20 minutos, recoloque suavemente a divisória de plástico nas câmaras de combate para separar as moscas e parar o vídeo.
- Para induzir uma forte mentalidade de "perdedor", certifique-se de que as moscas estabeleçam e mantenham uma relação de dominância durante as primeiras lutas e, em seguida, minimize a perturbação dos animais ao inserir as divisórias para separar as moscas.
- Após um período de descanso de 10 minutos, comece a gravar e remova cuidadosamente a divisória de plástico. Deixe as moscas interagirem por mais 20 minutos. Pare a gravação após 20 minutos. Para concluir o experimento, remova as moscas das câmaras comportamentais por geotaxia negativa, invertendo o procedimento descrito anteriormente.
