Microinjeção de embriões vivos de Drosophila: entrega precoce de reagentes ao embrião em desenvolvimento

- Colete embriões vivos de Drosophila e remova seus córions não transparentes. Em seguida, em uma lamínula de vidro, aplique uma linha de cola de heptano, que é fita adesiva dissolvida em heptano líquido. Para poder manusear os embriões agora descorionados, alinhe cuidadosamente as amostras em uma fileira no adesivo.

Transfira a lamínula para uma câmara de desidratação para dessecar parcialmente os embriões. Isso evitará vazamento citoplasmático durante ou após as injeções. Em seguida, remova a lamínula e cubra os embriões com óleo de halocarbono para evitar mais desidratação e ainda permitir que o oxigênio se difunda nos embriões.

Para realizar a microinjeção, use um sistema de microinjeção em um microscópio compatível. Olhando através dos pedaços dos olhos, identifique os embriões e a agulha pré-carregada com solução injetável. Abra a agulha e certifique-se de que ela produza gotas de líquido consistentes e de tamanho adequado. Em seguida, traga a agulha para dentro do embrião e injete o volume apropriado. Retire a agulha e prossiga para a próxima, repetindo a injeção para os embriões restantes.

No protocolo de exemplo, veremos uma demonstração de microinjeção de embriões de Dros