0 visualizações • 3:08 min. • April 30th, 2023
- Comece selecionando uma larva de terceiro ínstar, a maior das formas larvais, do meio de cultura e lave-a com água para remover qualquer alimento. Como os olhos larvais, ou órgãos de Bolwig, estão localizados na parte superior frontal da larva, coloque a larva no centro de uma placa de ágar com a fonte de luz acima do animal. Desligue a luz da sala e permita que a larva se acostume ao escuro.
Como a larva é quase imperceptível em um ponto de luz feito por luz visível, acenda as luzes LED infravermelhas para iluminar o animal para a câmera. Espere até que o animal comece a engatinhar direto para controlar seu caminho. Em seguida, gire a placa para que a larva rasteje diretamente em direção ao ponto de luz. Registre o animal rastejando para a luz e depois para longe do ponto de luz. Essa tática de evitar a luz ajuda as larvas a evitar predadores ao se enterrar na comida.
No exemplo a seguir, realizaremos o ensaio do ponto de luz para testar a capacidade de diferentes cepas genéticas de larvas de Drosophila de escapar da luz.
- Antes de introduzir a larva na configuração de imagem, adquira um pequeno vídeo da posição da luz e nomeie o vídeo de fundo de controle não filtrado como "lightarea1". Coloque o filtro de volta na lente da câmera e acenda uma luz longe do dispositivo experimental na configuração mais baixa possível, permitindo que as larvas sejam observadas claramente. Use uma colher para remover algumas larvas do meio de cultura e selecione delicadamente uma larva de terceiro ínstar.
Lave a larva em água destilada e coloque-a no centro da placa de ágar. Remova suavemente o excesso de água da larva e desligue a luz do ambiente. Deixe a larva se aclimatar por dois minutos no ambiente escuro antes de ligar a luz LED infravermelha. O seguinte experimento de comportamento de evitação de luz precisa ser realizado no escuro. Para a conveniência da demonstração, filmamos sob a luz forte.
Pincele suavemente a larva até o centro do prato. Quando a larva começar a rastejar em linha reta, gire a placa para fazer a larva ir em direção ao ponto de luz. Clique em Capturar, Configuração e Captura de vídeo para selecionar o caminho de salvamento. E clique em Iniciar gravação para gravar. Permita que a lava rasteje em direção, entre e saia do ponto de luz até que esteja quase fora do campo de visão e clique em Parar Gravação.
Afaste o filtro da câmera e obtenha um pequeno vídeo da posição do ponto de luz. Em seguida, nomeie a postagem como um vídeo não filtrado, "lightarea2", e compare este vídeo com o vídeo "lightarea1" para garantir que a posição do ponto de luz não seja alterada.