Yerel Isı Probu Tahlili: Drosophila Larvalarında Yüksek Sıcaklıkların Nociception'ını Değerlendirmek için Bir Yöntem

- Drosophila larvalarını bir ısı probu testi için hazırlamak, istenen gelişim aşamasındaki hayvanları toplamak ve tek larvaları ince bir su filmi ile bir test plakasına aktarmak.

Drosophila larvaları, epidermislerinde nosiseptör olarak bilinen multidendritik duyusal nöronlar aracılığıyla zararlı termal uyaranları tespit eder.

Isı probunu bu duyusal eşiği aşacak ve noseptörlerin ateş etmesine neden olacak bir sıcaklığa ayarlayın. Isı uygulamak için probun ucunu larvaya hafifçe bastırın. Larva, zararlı sıcaklığa termo-nosceptif davranışlarla yanıt verecek, probdan çekilecektir. Larva ısı probundan 360 derecelik bir rol sergilediğinde veya tanımlanmış bir zaman geçtiğinde durun.

Örnek protokolde, erken üçüncü instar Drosophila larvalarında lokalize bir ısı probu testinin bir gösterimini göreceğiz.

- İlk olarak, termal probun sıcaklığını istenen ayar noktasına önceden ayarlayın. Lavın ince bir su filmiyle kaplanmasını sağlamak için tek bir larvayı düz bir platforma hafifçe aktarmak için bir boya fırçası veya tokmak kullanın.

- Basınçtaki değişimi en aza indirmek ve ısı probunun doğru konumunu ve açısını sağlamak için uygulama mükemmel hale getirir.

- Prob ucunu A4 segmentinde larvaya hafifçe bastırın, uçla birlikte prob ile larva yüzeyi arasında yaklaşık 45 derecelik bir açıyla hafif basınç uygulayın. Basınç larva yüzeyinde hafif bir girintiye neden olmalıdır ve genellikle hareketlenmeyi önlemek için yeterli olacaktır. Geri çekilme yanıtı sergilenene veya 20 saniyelik kesmeye ulaşılana kadar larvayı uyarmaya devam edin.

Yanıt veren larvalar tipik olarak önce başı ve kuyruğu kaldırmanın ön davranışını, ardından en az 360 derece yuvarlanma davranışını gösterir. Çekilme davranışı başlatıldıktan sonra, probla teması serbest bırakın ve gecikme süresini veya çekilme için geçen süreyi kaydedin. 20 saniye içinde çekilme davranışı gözlenmezse, larva yanıt vermeyen bir davranıştır.