0 visualizações • 3:06 min. • April 30th, 2023
- Para começar, remova a cabeça de uma mosca adulta anestesiada. Cubra a mosca decapitada com uma solução contendo solução salina tamponada com fosfato, ou PBS, e albumina de soro bovino, ou BSA, para evitar a dessecação. Segure a mosca pelo tórax com uma pinça e, em seguida, puxe o abdômen com um segundo par de pinças para expor o intestino. Como a colheita, ou o saco de armazenamento de alimentos, será preso ao tórax, puxe suavemente o intestino para longe do tórax.
Uma vez destacado, puxe a colheita para longe do abdômen para desdobrar o intestino. Puxe a extremidade posterior da mosca para começar a libertar o intestino da cavidade abdominal. Continue puxando o intestino para puxar todo o tecido para fora do abdômen. Uma vez liberado, remova o intestino anterior, os túbulos de Malpighi, o intestino posterior e os ovários para deixar para trás apenas o intestino médio dissecado, o principal local de digestão dentro da mosca.
No protocolo de exemplo, dissecaremos o intestino médio de moscas adultas jovens e velhas para serem analisadas posteriormente por meio de Classificação de Células Ativadas por Fluorescência, ou FACS.
- Antes de iniciar a dissecação, anestesiar um frasco de 40 moscas com dióxido de carbono em um leito de mosca padrão. Em seguida, use uma lâmina de barbear para decapitar todas as moscas e transferi-las para uma placa de dissecação revestida com gel de agarose. Despeje PBS e BSA frios o suficiente no prato para cobrir a agarose. As moscas vão flutuar.
Então, para cada inseto, por sua vez, pegue um abdômen de mosca com um par de pinças e o tórax com outro. Separe o tórax do abdômen. O intestino ficará visível e a colheita provavelmente ainda estará conectada ao tórax. Pegue o intestino e puxe-o para fora do tórax. Em seguida, pegue o chicote e puxe o intestino ligeiramente anteriormente para longe do abdômen para desdobrá-lo.
Em seguida, use uma das pinças para agarrar a extremidade posterior do abdômen e a outra para agarrar a borda da cutícula aberta anteriormente. Puxe a extremidade posterior para quebrar a cutícula e continue puxando posteriormente com muito cuidado, até que todo o intestino tenha sido puxado para fora da cavidade abdominal. Remova o intestino anterior, as trompas de Malpighi, o intestino posterior e os ovários, deixando o intestino médio nu.
À medida que o intestino médio é isolado, use uma pipeta de vidro Pasteur para transferir periodicamente vários tecidos intestinais de uma vez para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro contendo PBS frio e BSA no gelo.