0 visualizações • 2:40 min. • April 30th, 2023
- Para testar a preferência de uma mosca fêmea por locais de postura ou oviposição, forneça a uma mosca fêmea individual uma escolha entre dois substratos diferentes para depositar seus ovos em uma câmara de teste. A mosca comparará as opções disponíveis e escolherá os locais de sua preferência, geralmente o substrato mais adequado para sua prole.
Certifique-se de que a mosca esteja preparada para botar muitos ovos, para que haja um número robusto de ovos em cada teste. No final do experimento, remova a mosca e conte os ovos em cada substrato para determinar a preferência de oviposição da mosca.
No protocolo de exemplo, usaremos um ensaio de alto rendimento para testar a preferência de postura de ovos por substratos de agarose simples ou contendo sacarose.
- Continue com o experimento obtendo câmaras de postura de ovos de acrílico previamente construídas. Insira folhas de plástico na parte superior, carregando um pedaço da câmara para servir como superfície inferior.
Em seguida, anestesie as fêmeas em uma almofada de dióxido de carbono e carregue-as individualmente em cada arena de postura de ovos. Deixe as moscas se recuperarem do dióxido de carbono por 30 minutos e se aclimatarem ao novo ambiente. Enquanto as moscas estão se ajustando, encha um tubo com agarose até a marca de 10 mililitros. Em seguida, prepare um substrato de sacarose de 150 milimolares colocando 750 microlitros de solução de sacarose 2 molares no tubo. Mantenha uma garrafa de agarose a 1% derretida em banho-maria.
Prepare o substrato simples da mesma maneira, mas substitua a solução de sacarose por água destilada. Em seguida, obtenha a peça de substrato da câmara e pipete 1.000 microlitros do substrato de agarose em cada calha. Deixe a agarose de lado para solidificar por 30 minutos.
Assim que os substratos de agarose e as moscas estiverem prontos, monte todas as três peças da câmara de postura e, em seguida, retire as folhas de plástico. Coloque as câmaras em incubadoras de moscas durante a noite.
Anestesie as fêmeas injetando dióxido de carbono na câmara. Desmonte a câmara e descarte as moscas anestesiadas. Finalmente, tire fotos dos ovos para manter registros.