Análise de vida útil: medindo a longevidade de C. elegans

0 views • 2:26 min • April 30th, 2023

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- Para medir a vida útil média de uma população de nematóides, comece com larvas L1 sincronizadas com o desenvolvimento no tampão M9. Determine a densidade das larvas e adicione 50 a cada placa. Prepare pelo menos três placas replicadas por condição, bem como placas de backup.

Permita que esses vermes se desenvolvam normalmente até atingirem o estágio L4. Agora você pode adicionar FUdR às placas, o que impedirá que os vermes produzam progênie. Como alternativa, você precisará mover os vermes para novas placas todos os dias após a contagem, para garantir que está medindo apenas a vida útil de uma única geração.

Em seguida, remova todos os machos. Isso removerá as variáveis de sexo e acasalamento do experimento. No dia seguinte, conte o número de vermes vivos no prato, procurando movimento espontâneo ou resposta ao toque suave. Remova todos os vermes mortos e registre os números. Conte os vermes sobreviventes diariamente até que não reste nenhum. No protocolo de exemplo, veremos uma demonstração de um ensaio de vida útil.

- Carregue as placas preparadas com sementes de bactérias com 50 animais L1 cada. Monte as placas em uma incubadora de 20 graus Celsius até que os embriões se desenvolvam até o estágio L4. O desenvolvimento normal de L1 a L4 leva cerca de 40 horas.

Em seguida, para evitar a produção de progênies, adicione 160 microlitros de 50x FUdR a cada placa. Em seguida, remova os machos, pois a expectativa de vida é normalmente medida apenas com hermafroditas. Depois de concluído, reembale as placas na incubadora de 20 graus Celsius.

Até que todos os vermes estejam mortos, marque sua viabilidade diariamente. Para fazer isso, toque suavemente cada nematóide imóvel na cabeça com um fio de platina ou cílio. Os animais não reagentes estão mortos e devem ser removidos da placa. Anote quaisquer anomalias durante esta rotina.

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Last updated: 4 July 2026