0 visualizações • 2:56 min. • April 30th, 2023
- Comece preparando o composto a ser testado quanto à toxicidade e distribua-o nos poços de uma placa de ensaio. Transfira vermes do estágio de desenvolvimento apropriado para cada poço e inicie imediatamente um cronômetro. Observe quaisquer vermes danificados e não os inclua em seus cálculos de sobrevivência.
Após um tempo predeterminado, conte o número de vermes que ainda estão vivos em cada poço. A luz brilhante de um microscópio de dissecação ou batidas suaves na placa devem fazer com que os vermes vivos se movam. Repita esta observação após cada intervalo de tempo, até que a maioria dos animais esteja morta. No protocolo a seguir, observaremos o tempo de sobrevivência das larvas L4 durante a exposição ao paraquat, um composto que induz estresse oxidativo.
- Nesta demonstração, o estresse oxidativo será induzido usando paraquat. Prepare uma nova solução de paraquat 100 milimolares conforme descrito no texto do protocolo anexo. O paraquat é um composto perigoso e altamente tóxico e deve ser manuseado de acordo com as diretrizes apropriadas.
Pipete 40 microlitros da solução de paraquat para cada poço de uma placa de 96 poços. Use pelo menos 12 poços como réplicas de todas as condições testadas. Usando uma picareta de verme de fio de platina, transfira de cinco a oito larvas L4 para cada poço.
Indique a hora de início e a hora de término para cada condição testada. Coloque a placa de 96 poços a 20 graus Celsius. Uma hora após o horário de início, marque os animais mortos e vivos usando um microscópio de dissecação. Agite suavemente o prato antes de começar a contar.
Os vermes que não se movem mesmo depois de detectar uma luz de alta intensidade são marcados como mortos. Observe a forma do verme, as caudas e o movimento da cabeça em alta ampliação para distinguir os vermes mortos dos vermes vivos. Marque a sobrevivência a cada hora até que a maioria dos vermes esteja morta e repita este ensaio pelo menos três vezes independentes.
Para determinar a porcentagem de sobrevivência para cada ponto de tempo, primeiro calcule o número total de animais por condição adicionando o número total de animais transferidos para cada poço. Ignore os animais que foram danificados ou mortos durante a transferência. Em seguida, para cada ponto de tempo, calcule o número total de animais mortos por condição. Calcule a porcentagem de morte e a porcentagem de sobrevivência.