Ensaio de postura de ovos: um método para quantificar o comportamento de postura de C. elegans

- Experimentos para quantificar a postura de ovos revelaram os componentes neurológicos e as pistas ambientais que afetam esse comportamento. Mudanças no comportamento de postura de ovos podem indicar efeitos tóxicos nos sistemas neuromuscular ou reprodutivo.

Para testar a toxicidade, crie ovos sincronizados com o desenvolvimento em placas de meio de crescimento de nematóides com e sem o composto de interesse. Esses experimentos usam alimentos de vermes bacterianos mortos pelo calor para evitar que as bactérias metabolizem o composto. Permita que esta geração cresça até se tornarem jovens adultos.

Em seguida, mova os vermes para novas placas sob o controle apropriado ou condições experimentais e deixe-os botar ovos por 24 horas. A cada dia, transfira os adultos para um novo prato e conte os ovos no prato anterior. Continue até que os adultos parem de botar, cerca de cinco dias para vermes do tipo selvagem. Calcule o número de ovos postos por verme adulto a cada dia e some o total no final do experimento.

No protocolo de exemplo, usaremos o ensaio de postura de ovos de C. elegans para testar o etoposídeo - um medicamento quimioterápico - quanto à toxicidade reprodutiva.

- Incube os ovos sincronizados com a idade na placa NGM contendo DMSO ou etoposídeo a 20 graus Celsius por 64 horas, até o estágio de adulto jovem. Transferir cinco vermes adultos para novas placas NGM sem produtos químicos ou novas placas NGM contendo o mesmo pré-tratamento químico e incubá-las durante 24 horas.

Transfira os adultos para novas placas NGM, como acabamos de demonstrar, e conte o número de ovos todos os dias. Além disso, conte os vermes que rastejaram, morreram ou eclodiram internamente. Realize cálculos de acordo com o protocolo de texto.