0 visualizações • 3:10 min. • April 30th, 2023
- Comece com ovos peletizados que foram isolados pelo branqueamento de vermes adultos grávidas. Certifique-se de que cada etapa deste procedimento seja conduzida de forma estéril para evitar a contaminação das células cultivadas. Suspenda o pellet em uma solução de quitinase, uma enzima que decompõe a quitina - um grande polissacarídeo que é um componente estrutural da casca do ovo.
Após um período de digestão adequado, centrifugue suavemente os ovos e substitua o sobrenadante por meio de cultura celular para interromper a digestão. Em seguida, passe os embriões por uma agulha de calibre 18 para separar mecanicamente as células individuais. Em seguida, filtre a solução para remover detritos da casca do ovo ou aglomerados de células não separadas. Coloque as células em uma placa de cultura em uma lamínula de vidro revestida com aglutinina de amendoim - uma lectina que ajuda as células a se ligarem à lamínula, ligando os carboidratos da superfície celular.
No protocolo de exemplo, prepararemos células embrionárias para diferenciação e análise morfológica in vitro.
- Enquanto trabalha sob uma capela de fluxo laminar para evitar a introdução de contaminação bacteriana, ressuspenda os o
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