Imagem de cálcio: um método para visualizar a atividade neural em C. elegans vivos

- Coloque um verme transgênico expressando GCaMP - uma proteína sensível ao cálcio - em uma câmara de imagem junto com alimento bacteriano para o verme. Em seguida, sele o prato com a tampa e o filme de laboratório para evitar a evaporação. Visualize-o sob um microscópio composto equipado para epifluorescência de campo amplo. Registre imagens de lapso de tempo dos vermes para rastrear seu comportamento e capturar fluorescência usando software de imagem.

Os vermes transgênicos expressam uma proteína sensor de GCaMP sob o controle de um promotor que impulsiona a expressão de GCaMP em um neurônio específico. Quando esse neurônio é ativado, ele dispara um potencial de ação, que despolariza a membrana plasmática. Após a despolarização, os canais de cálcio dependentes de voltagem se abrem na membrana plasmática. Isso causa um influxo de íons de cálcio na célula, resultando em excitação neuronal.

GCaMP no neurônio excitado se liga aos íons de cálcio. Isso faz com que o GCaMP fique fluorescente quando os vermes são fotografados com uma luz de excitação de fluorescência de baixa intensidade. No protocolo de exemplo, usaremos imagens de cálcio para visualizar a atividade do interneurônio AVA