Medidas da área muscular de C. elegans: um método padronizado para quantificar a morfologia do músculo estriado

- C. elegans tem dois tipos de músculos. Os músculos do sarcômero único ou não estriados incluem os da faringe e da vulva. Os múltiplos sarcômeros ou músculos obliquamente estriados são músculos da parede corporal em forma de romboide, nomeados pelo padrão estriado regular de suas fibras de miosina.

Eles são dispostos em pares escalonados como quatro feixes orientados longitudinalmente nos quatro quadrantes do corpo do verme visto em seção transversal. Cada célula tem muitos pontos de fixação igualmente espaçados à hipoderme e à cutícula. Esse arranjo ajuda a traduzir ondas de contrações musculares em locomoção suave.

Para visualizar esses músculos, imagens de vermes imobilizados com miosina transgênica marcada com GFP por microscopia confocal fluorescente. Use um software de análise para medir a área de uma célula muscular estriada e quaisquer lacunas no padrão de fibras dessa célula. Lacunas na organização das fibras musculares podem indicar ruptura por degradação das fibras ou acúmulo de detritos celulares. Calcule a proporção entre a área de folga e a área total para definir a quantidade de interrupção. No protocolo de exemplo, avaliaremos quantitativamente a morfologia muscular da parede corporal usando Fiji.

- Para medir a área da célula muscular, abra a imagem no software Fiji e use a seleção de polígonos para traçar cuidadosamente em torno de uma única célula muscular oblíqua. Ajuste a linha do polígono no final arrastando o ponto de âncora para melhorar o traçado. Navegue até a guia Analisar na parte superior do software e clique em Medir para calcular a área selecionada.

Para células musculares com uma região degenerada ou ausente, trace a área ausente com a ferramenta de seleção de polígonos e clique em Medir novamente. Se houver várias lacunas, trace cada uma separadamente. Calcule a proporção da área da lacuna para a área de toda a célula. Uma proporção alta indica uma maior extensão da degeneração muscular e, se não houver regiões ausentes, a proporção é calculada como zero.