0 visualizações • 2:56 min. • April 30th, 2023
- C. elegans é usado como um modelo experimental de infecção por patógenos intestinais que causam doenças, em parte, por romper a barreira intestinal, aumentando sua permeabilidade. Para quantificar a integridade da barreira após a exposição a uma bactéria ou composto químico de interesse, colete vermes lavando-os de seus pratos.
Em seguida, coloque esses vermes em placas de ágar com alimentos rotulados compostos de E. coli morta pelo calor misturada com FITC-dextrano, um polissacarídeo de alto peso molecular com uma etiqueta fluorescente.
Permita que os vermes comam as bactérias rotuladas. Aqueles com barreiras intestinais intactas eliminam rapidamente o alimento, enquanto em vermes com intestinos mais permeáveis, o marcador fluorescente penetra além do lúmen do órgão.
Transfira os vermes para uma solução de formaldeído para fixar os animais. Após 1 a 2 minutos, substitua o formaldeído por um meio de montagem.
Finalmente, imagine os vermes por microscopia fluorescente. Observe que os grânulos intestinais de C. elegans são autofluorescentes, portanto, haverá sinal de fundo. Mas, no geral, mais fluorescência intestinal indica maior permeabilidade.
No protocolo de exemplo, vamos test
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