Irradiação UV: Um Método para Integrar Arranjos Extracromossômicos

- A criação de matrizes de DNA extracromossômico por microinjeção - o método mais simples para gerar cepas de vermes transgênicos - resulta em elementos genéticos que não são transmitidos de forma estável durante a divisão celular e, portanto, exibem taxas de herança e níveis de expressão variáveis. O objetivo de integrar a matriz em um cromossomo é diminuir essa instabilidade e variabilidade genética.

Para fazer isso, comece com uma população sincronizada com a idade de vermes transgênicos L4, que carregam uma matriz extracromossômica previamente introduzida por microinjeção e permitem que eles se transformem em adultos grávidas. Transfira esses adultos para novos pratos e deixe-os botar ovos até que haja pelo menos 30 ovos em cada prato. Remova os adultos e deixe os ovos crescerem até atingirem o estágio L4. Em seguida, irradie os vermes com luz ultravioleta. Isso causa quebras aleatórias de fita dupla no DNA genômico, onde o maquinário de reparo de DNA de vermes pode incorporar arbitrariamente a matriz.

Após um período de recuperação durante a noite, conte o número de vermes sobreviventes. Uma pequena porcentagem de vermes mortos indica irradiação eficiente. Observe as gerações