Tratamento com estreptozocina: um modelo de peixe-zebra de diabetes mellitus tipo 1

- O diabetes mellitus tipo 1 é uma doença humana na qual o sistema imunológico destrói as células beta produtoras de insulina no pâncreas. A estreptozocina pode induzir diabetes mellitus tipo 1 no peixe-zebra. Primeiro, anestesiar um peixe em uma solução de 2-fenoxietanol na água dos peixes. Pegue o peixe e coloque-o em uma placa de Petri, com o lado ventral voltado para cima. Calcule a dose de estreptozocina com base em 0,35 miligramas por grama de peso do peixe e dilua-a em solução salina.

Administre a estreptozocina por injeção intraperitoneal abaixo da cintura pélvica no lado ventral do peixe-zebra. A estreptozocina é estruturalmente semelhante à N-acetilglucosamina, um ligante que se liga ao receptor GLUT2 nas células beta pancreáticas, levando à secreção de insulina. Assim, a estreptozicina se liga aos receptores GLUT2 presentes nas células beta pancreáticas que a transportam para dentro das células.

Ao entrar nas células beta, a estreptozicina desencadeia uma resposta imune que leva à liberação de autoantígenos. Os autoantígenos fazem com que o sistema imunológico reconheça as células beta como estranhas e as destrua, levando a níveis reduzidos de insulina. Administre doses repetidas de estreptozocina nos dias três e cinco, seguidas de doses semanais, uma a cada sete dias para manter a resposta imunológica.

No exemplo a seguir, geraremos um modelo de peixe-zebra de diabetes mellitus tipo 1. Para gerar peixe-zebra com diabetes mellitus, prepare um tanque de recuperação com água normal de peixe e um tanque anestésico de água de peixe com uma diluição de 1 a 1.000 de 2-fenoxietanol. Sob uma capela de exaustão, prepare uma solução de estreptozocina a 0,3% ou STZ adicionando 6 miligramas de STZ a 2 mililitros de cloreto de sódio a 0,09% e coloque imediatamente a solução no gelo.

Em um tubo separado, alíquota salina suficiente para peixes de controle. Encha uma seringa de meia CC equipada com uma agulha de calibre 27 e 1/2 com o STZ, ou soluções de controle, garantindo que nenhuma bolha de ar fique presa. Anestesie um único peixe colocando-o em água anestésica e esperando até que o movimento de natação cesse, cerca de um a dois minutos.

Depois de anestesiado, coloque brevemente o peixe em uma toalha de papel para absorver o excesso de água. Em seguida, coloque o peixe em um barco de pesagem e pese-o. Em seguida, coloque o peixe em uma superfície firme. Em seguida, insira a agulha além do chanfro na face posterior do peritônio ventral e injete 0,35 miligramas por grama de STZ ou um volume equivalente de solução de controle na cavidade peritoneal do peixe.

Após a injeção, coloque o peixe no tanque de água de recuperação e monitore-o quanto à atividade normal de natação. Depois de injetar peixes suficientes para o experimento, transfira-os para tanques vivos normais e mantenha-os a uma temperatura de 22 a 24 graus Celsius. A temperatura reduzida é crítica para a indução eficiente da hiperglicemia. Para induzir um estado prolongado de hiperglicemia muito alta, siga um cronograma de injeções frequentes durante a fase de indução, seguidas de injeções semanais de manutenção, conforme mostrado aqui.