Ensaio XTT: Um ensaio colorimétrico para avaliar a viabilidade celular e a atividade mitocondrial

- As ondas de ultrassom de baixa frequência levam à lise seletiva das células de leucemia humana e o ensaio XTT ajuda a determinar o grau desse dano. O ensaio funciona com base no princípio de que as enzimas mitocondriais de células saudáveis convertem um corante XTT amarelo em um composto laranja chamado formazan. Para iniciar o ensaio, trate as células com metil beta-ciclodextrina, um agente destruidor de colesterol e, posteriormente, sonique as células em baixa potência para induzir danos celulares.

Centrifugue para peletizar as células e adicione meios de crescimento celular frescos ao pellet. Semeie as células na concentração desejada em uma microplaca de vários poços e incube-a durante a noite. Agora, adicione a solução de XTT ativada às células e incube até que a cor laranja se desenvolva nos poços da microplaca. Colocar a placa num espectrofotómetro. Meça a absorbância em 450 a 500 nanômetros e depois em 630 a 690 nanômetros. Subtraia os dois valores para obter resultados precisos. O maior valor de absorbância no ensaio XTT indica a maior atividade das enzimas mitocondriais e maior viabilidade celular.

No vídeo a seguir, demonstraremos o uso do ensaio XTT para determinar a