Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:59 min. • April 30th, 2023
- Comece com uma suspensão de células de leucemia contendo a densidade celular desejada. Centrifugar e ressuspender as células num meio de cultura contendo soro. A adição de soro promove o crescimento celular contínuo e as células se movem pelas diferentes fases do ciclo celular. Dilua as células em uma solução de marcação de bromodeoxiuridina, ou BrdU, e cultive-as em condições fisiológicas pela duração necessária.
As células na síntese ou fase S absorvem BrdU - um análogo da timidina - que substitui a timidina durante o processo de replicação do DNA. Centrifugue as células para remover o excesso de BrdU e ressuspenda as células em um meio adequado. Transfira as células para uma placa de poços múltiplos. Permita que as células cresçam em condições fisiológicas por diferentes períodos de tempo.
Em vários períodos de tempo, as células progridem através do restante das fases S, G2, mitose e G1 e entram no próximo ciclo celular, permitindo a estimativa da proliferação celular. Realize a coloração de anticorpos para marcar BrdU com anticorpo fluorocromo e medir a proliferação celular usando citometria de fluxo.
Dentro do citômetro de fluxo, os fluorocromos absorvem a energia do laser e
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