Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:24 min. • April 30th, 2023
- Bromodeoxiuridina ou BrdU é um análogo sintético do nucleosídeo da timidina. Durante a fase de síntese do ciclo celular, o BrdU substitui a timidina e se integra ao DNA recém-sintetizado. O BrdU incorporado permite o rastreamento da progressão do ciclo celular. Para detectar o BrdU incorporado, primeiro fixe e permeabilize as células para torná-las permeáveis.
Em seguida, trate as células com a enzima DNAse para clivar as fitas de DNA e expor o BrdU incorporado. Em seguida, adicione um anticorpo anti-BrdU marcado com fluorescência adequado. O anticorpo entra no núcleo e se liga prontamente ao BrdU exposto presente no DNA.
Além disso, trate as células com um corante fluorescente adequado de ligação ao DNA. O corante se liga ao DNA, permitindo a quantificação do conteúdo total de DNA. Use citometria de fluxo para detectar a fluorescência de BrdU e DNA marcados.
As intensidades de fluorescência do DNA marcado diferenciam as células em diferentes fases do ciclo celular com base na variação no conteúdo total de DNA. O sinal fluorescente de BrdU identifica a posição atual do ciclo celular das células incorporadas ao BrdU.
Neste exemplo, realizaremos a coloração imunofluorescente BrdU d
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