Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:12 min. • April 30th, 2023
- May-Grunwald Giemsa, ou coloração MGG, é um procedimento de duas etapas para a coloração diferencial de células da medula óssea, ou BMCs. Para começar a colorir, obtenha um esfregaço concentrado de monocamada de BMCs em uma lâmina de vidro. Deixe o esfregaço secar ao ar. Trate as células primeiro com a coloração de May-Grunwald contendo eosina e azul de metileno dissolvido em metanol.
O solvente metanol inicialmente fixa as células. O azul de metileno, um corante básico com carga líquida positiva, cora componentes celulares ácidos como ácidos nucléicos. A eosina, um corante ácido com carga líquida negativa, cora componentes celulares básicos, como proteínas catiônicas citoplasmáticas. Trate as células com uma solução tampão de pH 6,8 para permitir que o corante precipite e se ligue bem aos materiais celulares.
Além disso, trate as células com coloração Giemsa, também contendo corantes ácidos e básicos, para aumentar o efeito geral da coloração. Os corantes básicos, azul de azul e metileno, intensificam a coloração dos componentes ácidos, enquanto o corante ácido, eosina, aumenta a coloração dos componentes básicos.
Sob um microscópio, os eritrócitos aparecem marrom-rosados e as plaquetas como pequenos pontos roxos. Os granulócitos exibem núcleo multilóbulo azul-púrpura e citoplasma granulado vermelho. Os agranulócitos aparecem em azul claro com um grande núcleo rosa-púrpura. No protocolo a seguir, mostramos a coloração MGG de células da medula óssea.
- Para preparar as células da medula óssea para coloração, primeiro coloque as lâminas em câmaras descartáveis com cartões de filtro pré-fixados e coloque as câmaras em uma citocentrífuga. Adicione 100 microlitros de tampão FACS a cada câmara de cartão de filtro e centrifugue brevemente as lâminas. No final da centrifugação, adicione 100 microlitros de células a cada câmara e centrifugue as células.
Em seguida, remova cuidadosamente as lâminas das câmaras para secagem ao ar. Para corar as células da medula óssea, mergulhe as lâminas em um frasco Coplin contendo a solução de May-Grunwald por 5 minutos. Em seguida, transfira as lâminas para um frasco de solução tampão com pH de 6,8 por 1 minuto. Em seguida, transfira as lâminas para a solução Giemsa R por 10 minutos, seguida de uma lavagem de 10 segundos com água com pH neutro.
Após a lavagem, deixe as lâminas secarem ao ar e aplique uma gota de meio de montagem em cada amostra. Em seguida, coloque uma borda de uma lamínula na lâmina e abaixe cuidadosamente a lamínula sobre as células, pressionando suavemente para remover quaisquer bolhas de ar.