Centrifugação por gradiente de densidade: um método para isolar células LLC do sangue periférico

- Em pacientes com leucemia linfocítica crônica, ou LLC, os linfócitos das células B aumentam significativamente na medula óssea e no sangue. Para isolar essas células da LLC de uma amostra de sangue, primeiro trate a amostra com um coquetel de enriquecimento de células B humanas que separa as células B usando seleção negativa. Os anticorpos no coquetel reconhecem e reticulam especificamente os antígenos expressos por células não B e eritrócitos, formando complexos densos.

Em seguida, coloque a amostra em camadas sobre um meio de gradiente de densidade com uma densidade ideal para isolamento de linfócitos. Com a centrifugação subsequente, os diferentes componentes sanguíneos se separam com base nas variações em suas densidades em relação ao meio gradiente. Os complexos de hemácias-não-células B com densidades mais altas se depositam através do meio, formando um pellet. A fração de plasma menos densa forma a camada superior. As células LLC menos densas formam uma camada branca na interface do meio de densidade plasmática.

Transfira cuidadosamente a camada branca para um tubo novo. Centrifugue novamente para obter um pellet contendo células LLC purificadas. No protocolo a seguir, mos