Preparação de Frações Subcelulares de Células Leucêmicas: Um Método para Gerar Frações Celulares e Nucleares de Células Leucêmicas

- Nas células leucêmicas, o transporte de macromoléculas, como algumas proteínas supressoras de tumor entre o núcleo e o citoplasma, é desregulado. A localização incorreta dessas proteínas as torna inativas, resultando no crescimento descontrolado de células leucêmicas. Podemos determinar a localização aberrante de tais proteínas gerando a fração citoplasmática e nuclear a partir de células leucêmicas.

Comece pegando o volume desejado de células leucêmicas em um tubo de microcentrífuga e centrifugue para pellet a célula. Ressuspenda o pellet em um tampão de lise hipotônico e, em seguida, adicione a concentração desejada de detergente. O tampão de lise hipotônica faz com que as células inchem e quebrem a membrana plasmática, deixando a membrana nuclear intacta, isolando assim as frações citoplasmáticas. O detergente auxilia na extração de proteínas de organelas citoplasmáticas.

Centrifugar as células lisadas em suspensão e transferir o sobrenadante para um novo tubo. O sobrenadante contém a fração citoplasmática da célula. Para preparar a fracção nuclear, ressuspender o sedimento restante no tampão de lise completo e adicionar detergente. Centrifugue e recolha a fracção nuclear pres