Colheita de medula óssea do membro posterior do camundongo

- A medula óssea é o tecido gelatinoso esponjoso presente no centro oco dos ossos. Ele contém células-tronco hematopoiéticas, que produzem as células sanguíneas, um componente-chave do sistema imunológico. O isolamento da medula óssea de ossos maiores, como o fêmur e a tíbia, fornece alto rendimento celular.

Para colher medula óssea, coloque um camundongo sacrificado em decúbito dorsal e esterilize a pele usando etanol. Corte a cavidade abdominal e remova a pele para expor os membros posteriores. Quebre a tíbia, um osso longo da perna, e coloque-a em PBS frio para manter as condições fisiológicas. Deslocar a rótula e remover os músculos para expor o fêmur, o osso da coxa.

Corte o fêmur da parte inferior do osso e coloque em PBS frio. Faça um furo em um tubo de microcentrífuga de menor volume e coloque os dois ossos nele com a extremidade aberta dos ossos voltada para o orifício. Coloque o tubo que contém os ossos em um tubo de microcentrífuga de maior volume e centrifugue os tubos de camada dupla para peletar a medula óssea. Use a medula óssea colhida para análise posterior. Neste protocolo, colheremos medula óssea dos membros posteriores de um camundongo.

- Para uma colheita de medula óssea, coloque um camundongo C57 black-6 de 6 a 10 semanas de idade na posição supina em uma almofada cirúrgica estéril e use etanol a 70% para esterilizar o abdômen e os membros posteriores. Use uma tesoura cirúrgica de dissecação para abrir a cavidade abdominal e remover a pele para expor os membros posteriores. Usando um par de pinças de curativo de ponta romba, segure a tíbia do rato logo abaixo do tornozelo e use um par de pinças de curativo curvas para estabilizar a tíbia abaixo da pinça de curativo de ponta romba.

Use a pinça de curativo de ponta romba para quebrar a tíbia e remover o músculo para expor o osso, antes de colocar a tíbia em PBS frio. Mova a pinça de curativo curva estabilizadora para o fêmur e deslize a pinça de curativo de ponta romba abaixo da articulação do joelho para segurar a rótula. Puxe suavemente para cima para deslocar a rótula e remova o músculo da rótula para expor o fêmur. Segure o fêmur exposto pela pinça de curativo curvo e use uma tesoura cirúrgica para cortar o fêmur da parte inferior do osso. Em seguida, coloque o fêmur em PBS.

Em seguida, use uma agulha de calibre 18 para fazer um furo em um tubo de microcentrífuga de 0,5 mililitro e coloque os dois ossos no tubo com as extremidades abertas dos ossos voltadas para baixo no orifício. Coloque o tubo de 0,5 mililitro em um tubo de microcentrífuga de 1,7 mililitro e gire os tubos de camada dupla em uma microcentrífuga. No final da centrifugação, confirme se a medula óssea foi extraída para o fundo do tubo.