Enriquecimento de células T: uma técnica para isolar células T da população de células mistas por separação magnética

- As células T, uma classe de linfócitos, desempenham um papel ativo no combate à infecção. Juntamente com vários outros tipos de células sanguíneas, as células T imunocompetentes estão presentes no baço e nos gânglios linfáticos de camundongos. Para isolar seletivamente as células T, colha o baço murino e os gânglios linfáticos e macere-os em um filtro de células. Lave o tecido com um meio apropriado para obter uma suspensão de célula única.

Adicione cloreto de amônio e potássio, ou tampão ACK, para lisar os glóbulos vermelhos. Centrifugue para separar as células sanguíneas intactas do lisado. Rejeitar o sobrenadante e ressuspender as células num tampão adequado. Trate a suspensão com uma mistura de anticorpos anticamundongos biotinilados para atingir células sanguíneas como granulócitos, células B, células NK e quaisquer eritrócitos restantes. As células T não são direcionadas e, portanto, permanecem não marcadas.

Em seguida, adicione microesferas magnéticas anti-biotina à suspensão. Todas as células marcadas com biotina se ligam às microesferas. Quando mantidas sob a influência de um forte campo magnético, as células marcadas magneticamente aderem à parede do tubo. As células T