Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 6:29 min. • April 30th, 2023
- A imunoprecipitação da cromatina, ou ChIP, é uma técnica usada para determinar as interações proteína-DNA nas células. As proteínas se ligam a locais específicos no DNA e regulam a expressão gênica. Primeiro, estabilize o complexo DNA-proteína com formaldeído. O formaldeído liga proteínas à sequência de DNA associada, formando ligações covalentes.
Em seguida, use um tampão de lise adequado para lisar as células para liberar cromatina contendo os complexos DNA-proteína reticulados. Centrifugar a suspensão e sonicar o sobrenadante para obter fragmentos de cromatina. Posteriormente, rotule a amostra com um anticorpo adequado que se liga especificamente à proteína ligada ao DNA.
Adicione esferas magnéticas especializadas à amostra. O cordão reconhece o anticorpo e se liga a ele. Use um ímã para coletar as esferas magnéticas com o complexo anticorpo-proteína-DNA. Lave a amostra para remover a cromatina ou anticorpos não ligados. Adicione um tampão de alta concentração de sal ao complexo e incube em temperaturas mais altas para reverter as ligações cruzadas das proteínas do DNA.
Usando um ímã, colete o sobrenadante contendo o DNA e as proteínas. Adicione a enzima proteinase K para degr
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