Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 5:21 min. • April 30th, 2023
- A célula-tronco hematopoiética e progenitora ou HSPC, pode se auto-renovar e se diferenciar em vários tipos de células sanguíneas. As HSPCs acumulam gradualmente mutações no DNA durante a vida, o que pode contribuir para a leucemia. Para analisar essas mutações, as HSPCs são geradas geralmente a partir da medula óssea.
Comece adicionando anticorpos conjugados com fluoróforo a células mononucleares - células-tronco adultas isoladas da medula óssea - e incubando-as pela duração desejada. Os anticorpos se ligam a marcadores específicos de superfície celular, como CD34. Agora, carregue a mistura na citometria de células ativada por fluorescência ou na máquina FACS.
Os anticorpos conjugados com fluoróforo fluorescem quando atingidos pelo laser. Gotículas de células individuais passam pelo detector que mede a intensidade da fluorescência, com base na qual a gota possui uma carga elétrica. Na presença de campos eletromagnéticos, as células carregadas positivamente se movem para o recipiente negativo e vice-versa.
Agora, cultive os HSPCs CD34-positivos classificados por FACS em um meio apropriado pela duração desejada até que os clones sejam visíveis. Em seguida, desaloje os clones por p
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