Classificação de células ativadas por magnetismo: um método para isolar células positivas do c-kit

- c-Kit, ou CD117, é um receptor transmembrana de tirosina quinase expresso por células-tronco hematopoiéticas ou progenitoras presentes na medula óssea e no sangue. É também um marcador para detectar leucemia mieloide aguda.

Para isolar as células positivas do c-Kit, colha os ossos murinos da perna e esmague-os para liberar a medula de dentro. Filtre a suspensão da medula para remover quaisquer fragmentos ósseos. Colocar o filtrado contendo células da medula óssea num meio de gradiente de densidade e centrifugar para separar as células mononucleares das outras frações.

Colete a camada turva de células mononucleares em um tubo contendo microesferas conjugadas a anticorpos anti-CD117 de camundongo. Incube para que os complexos anticorpo-grânulos se liguem aos receptores CD117 em células positivas para c-Kit. Passe a suspensão incubada através de uma coluna magnética colocada em um campo magnético. Todas as células positivas do c-Kit marcadas com as microesferas magnéticas permanecem na coluna, enquanto as células não marcadas passam.

Remova a coluna do campo magnético e lave o conteúdo usando um tampão adequado para eluir as células positivas do c-Kit. No protocolo a seguir, mostrar