Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:59 min. • April 30th, 2023
- Retrovírus são vírus de RNA que se replicam usando transcriptase reversa para converter seu genoma de RNA em DNA de fita dupla e se integrar permanentemente ao genoma do hospedeiro. Novas partículas virais saem da célula e podem infectar outras células. A terapia genética do câncer emprega vetores retrovirais para introduzir genes terapêuticos nas células-alvo por meio de uma técnica chamada transdução para regular negativamente o gene mutado ou eliminar células.
Para obter vetores retrovirais de alto título, transfecte as células HEK 293 com uma mistura de transfecção contendo o plasmídeo retroviral desejado, plasmídeo de embalagem e um agente de transfecção adequado. Incube as células. O agente transfectivo facilita a entrega de ambos os plasmídeos nas células.
O plasmídeo retroviral codifica o genoma viral com o gene alvo, enquanto o plasmídeo de embalagem codifica as proteínas do envelope viral. A maquinaria celular das células de empacotamento forma partículas retrovirais e as libera no meio. Colete o sobrenadante viral e centrifugue para remover as células.
Transfira a concentração desejada de partículas virais e células cancerígenas para uma placa de cultura revestida com
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