Extração de miRNA circulante: um método para isolar miRNA de amostras de plasma por meio de extração orgânica e enriquecimento de RNA pequeno

- MicroRNAs ou miRNAs são pequenos RNAs não codificantes que regulam a expressão gênica degradando o mRNA ou bloqueando sua tradução em proteínas funcionais. Os miRNAs circulantes são potenciais biomarcadores de câncer e podem ser extraídos de fluidos corporais como o plasma. Para começar, misture o plasma com uma solução desnaturante que simultaneamente homogeneíza a amostra e inibe as ribonucleases degradadoras de RNA.

Trate com fenol-clorofórmio ácido e centrifugue para separar a amostra em duas fases, uma fase orgânica inferior contendo DNA e proteínas e uma fase aquosa superior contendo RNA. Recupere a fase aquosa. Adicione etanol absoluto para precipitar o RNA da solução.

Traga a concentração de etanol da amostra para 25% para definir uma condição inicial propícia à grande separação de RNA. Transfira a mistura para um cartucho filtrante pré-montado e centrifugue. Os RNAs grandes imobilizam seletivamente no filtro, enquanto os miRNAs menores se acumulam no filtrado.

Posteriormente, aumentar a concentração de etanol para 55% para favorecer o isolamento de miRNA. Transfira o filtrado para um novo cartucho de filtro e centrifugue para capturar os miRNAs. Coloque o cartucho em um