Injeção de células tumorais intracecais: uma técnica para entregar células cancerígenas para estabelecer o modelo ortotópico de camundongo com câncer colorretal

- A injeção de tumor ortotópico intracecal fornece células tumorais correspondentes ao histotipo do tecido cecal diretamente no ceco do animal receptor. Para começar, prepare um camundongo anestesiado para a cirurgia. Incisar sua parede abdominal para exteriorizar o ceco. Raspe a parede cecal para diminuir qualquer movimento peristáltico intestinal. Alinhe uma seringa contendo células cancerígenas colorretais ou suspensão de CRC paralelamente sobre o ceco.

Em seguida, estique o ceco para remover quaisquer dobras. Puxe suavemente o ceco sobre a cânula de forma que a ponta perfure apenas a membrana intestinal externa fina e translúcida ou serosa. Em seguida, injete a suspensão de células cancerígenas no espaço entre a serosa e a camada muscular interna. Garanta a entrega completa da suspensão celular e retraia a cânula. Retorne o ceco para a cavidade abdominal e suture a incisão cirúrgica. Permita que o mouse se recupere.

Poucos dias após a injeção, um tumor ortotópico se desenvolve no local da injeção ou metástase para tecidos ou órgãos distantes. No protocolo a seguir, demonstraremos uma técnica de injeção de células de câncer colorretal intracecal para desenvolver um modelo ortotópico de camundongo CRC.

- Comece usando uma pinça atraumática para exteriorizar cuidadosamente o ceco de um camundongo imunocomprometido de seis a oito semanas, colocando a extremidade cega do ceco no abdômen de modo que a bolsa aponte cranialmente. Para a injeção intracecal, monte uma seringa padrão de 1 mililitro equipada com uma cânula de calibre 30 e carregada com as células tumorais em uma bomba de microinjeção montada em um micromanipulador. Em seguida, use a pinça atraumática para segurar cuidadosamente a ponta do ceco e use uma segunda pinça umedecida com solução salina morna para alisar suavemente o ceco com movimentos descendentes.

Agora, mova o animal sob um microscópio cirúrgico binocular e, com a cânula diretamente paralela e acima do ceco, use duas pinças atraumáticas para esticar cuidadosamente o tecido em ambas as extremidades da extremidade exteriorizada do ceco. Puxe lentamente o ceco sobre a cânula, tomando cuidado para não perfurar toda a parede intestinal ou a serosa além do ponto inicial de penetração, e coloque a cânula acima dos vasos sanguíneos e sob a fina membrana translúcida dentro da parede intestinal. Quando a cânula estiver no lugar, use um pedal para injetar 20 microlitros de células durante um período de 20 segundos entre o fino revestimento translúcido da serosa acima dos vasos sanguíneos intramurais e a muscular.

Quando todas as células tiverem sido injetadas, remova cuidadosamente a cânula e coloque um cotonete seco sob o ceco. Para evitar a disseminação peritoneal artificial, lise as células vazadas com um enxágue completo com água destilada e retorne suavemente o ceco à cavidade abdominal. Feche a parede abdominal com suturas de corrida 6-0 rapidamente absorvíveis e a pele com clipes de ferida cirúrgica. Em seguida, coloque o mouse em uma esteira de aquecimento ajustada a 38 graus Celsius com monitoramento até a decúbito total.