Modelagem de Xenoenxerto Derivado de Paciente: Uma Técnica para Gerar Modelos de Camundongos de Melanoma

- Em modelos de xenoenxerto ou PDX derivados de pacientes, células tumorais ou fragmentos de pacientes humanos são implantados em camundongos receptores imunodeficientes. Os modelos PDX simulam as características biológicas e moleculares do microambiente tumoral humano. Para desenvolver um modelo PDX de melanoma, primeiro colha tecido tumoral de um paciente com melanoma. Remova o tecido necrótico do tumor. Pique o tumor para obter uma pasta. Em seguida, prepare um camundongo receptor anestesiado em decúbito ventral. Faça uma pequena incisão cirúrgica na pele dorsal. Corte suavemente a membrana fascial ou a camada de tecido conjuntivo solto logo abaixo da pele. Isso separa a pele das camadas musculares subjacentes e ajuda a criar uma bolsa para a implantação do tumor.

Transfira suavemente a pasta do tumor para a bolsa. Agora, administre uma matriz extracelular artificial na bolsa para estabilizar e proteger as células tumorais implantadas. Grampeie cirurgicamente a ferida e permita que o rato se recupere. Monitore o camundongo receptor semanalmente para observar o crescimento do tumor de xenoenxerto. No protocolo a seguir, demonstraremos a implantação subcutânea de células tumorais de melanoma derivadas de pacientes em um camundongo NSG imunodeficiente para gerar modelos de xenoenxerto derivados de pacientes com melanoma.

- Para implantar excisão cirúrgica ou tecido de biópsia cirúrgica, primeiro, raspe o cabelo da parte inferior das costas de camundongos anestesiados NSG de seis a oito semanas de idade, deixando uma área de aproximadamente 1,5 centímetros a 3 centímetros sem cabelo. Prepare pedaços de tumor e divida a pasta do tumor em uma placa de Petri em montes individuais para implantação cirúrgica. Usando uma lâmina de bisturi, faça uma incisão de aproximadamente 5 milímetros de comprimento no centro da parte de trás do mouse. Com um par de pinças, levante a pele do lado da incisão oposto ao operador. Com uma tesoura na outra mão, separe a pele da camada muscular cortando suavemente a membrana fascial com pequenos cortes em tesoura, criando assim uma bolsa para o tecido tumoral.

Use uma lâmina de bisturi para pegar um pedaço de tumor, bem como um monte individual de tecido de pasta tumoral e coloque suavemente o tecido na bolsa criada. Em seguida, adicione 100 microlitros de matriz extracelular artificial no monte de tecido tumoral na bolsa. Usando dois pares de pinças, puxe a incisão em ambas as extremidades para que as bordas da ferida se aproximem. Em seguida, aplique um ou dois clipes para fechar a ferida. Injete por via subcutânea 1-5 miligramas por quilograma de analgésico. Quando a cicatrização estiver completa, após aproximadamente 7 dias, remova os clipes da ferida.