Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:46 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa de vários poços contendo macrófagos derivados da medula óssea em lamínulas.
Trate os macrófagos com promastigotas de Leishmania - o estágio infeccioso do parasita.
Durante a incubação, os parasitas interagem com os macrófagos, facilitando a montagem da F-actina ao redor do local de interação.
Os macrófagos engolfam os parasitas em fagossomos cercados por F-actina, formando vacúolos parasitóforos ou PVs - um nicho replicativo.
Dentro dos PVs, os parasitas liberam fatores de sobrevivência, aumentando o acúmulo de F-actina ao redor dos vacúolos e inibindo sua fusão com os lisossomos.
Além disso, os parasitas regulam positivamente a produção de hepcidina - um hormônio peptídico de macrófagos, inibindo a liberação de ferro e elevando os níveis de ferro intracelular.
O influxo de ferro em vacúolos promove a diferenciação de promastigotas em amastigotas patogênicos e facilita sua multiplicação, aumentando a virulência.
Pós-incubação, lave para remover os parasitas livres e, em seguida, fixe e permeabilize os macrófagos infectados.
Introduza um corante fluorescente de ácido nucleico para corar os núcleos de macrófagos e amastigotas infectados.
Sob um microscópio de flu
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