Name: SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Öğrenin SJL farelerde deneysel otoimmün hipofizitis indüksiyonu ve histopatolojik analiz yöntemlerini. Bu protokol, insan hastalığına benzeyen bir fare modeli oluşturarak otoimmün bozuklukların patogenezini araştırmaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma NIH hibe DK080351 PC ve Terry ve Kristine Gore ailesi cömert bir hediye tarafından desteklenmiştir.

Deneysel Protokolü Hipofiz immünojen (arkadaşı makalesine bakın) hazırlandıktan sonra, subkutan SJL fareler (Jackson Laboratuvarları, stok 000.686) içine enjekte edilir. 7 gün sonra ikinci bir aynı enjeksiyon tekrarlanır. Fare sonra in vivo ve post-mortem sonuçlarını toplamak için kullanılır. 1. Adım. Hipofiz immünojen SJL farelere subkutan enjeksiyon Fare ilk kez, 20 mg / ml 2,2,2-Tribromoethanol 0,5 ml (Avertin, TCI Amerika, T-1420) intraperitoneal olarak enjekte edilerek anestezi. Fareler, 2181 makale vallahi arkadaşı belirtildiği gibi, hipofiz emülsiyon 100 ul sonra subkutan enjekte hipofiz özü ve tam Freund adjuvan 0.25 mg, 1 mg. Emülsiyon sol dorsal arka bacak bölgesi ((50 mcL) ve sağ inguinal bölge (50 mcL) enjekte edilir. Hipofiz emülsiyon ters siteleri (50 ul ve sağ dorsal arka bacak bölgede 7 gün tekrar enjekte edilir. sol inguinal bölgede 50 ul). Fareler ilk 3 gün için günlük olarak izlenmekte ve gün kurban, genellikle ilk aşıdan sonra 28 gün kadar sonra haftalık. 2. Adım. In vivo sonuçlarının toplanması: Kan testleri Fareler hala hayatta iken en yaygın deneysel sonuçlarını değerlendirmek için kullanılan doku kan. Kan hipofiz antikorları veya sitokinler ve kemokinler gibi diğer belirteçlerin serum düzeyleri ölçmek için ilk aşıdan sonra 14 gün rutin olarak çizilir. Kan, aşağıdaki gibi canlı fareler toplanır. Fare boynun ense tarafından güvenli bir şekilde tutulur ve çene kemiğinin arkasında yer alır. Çene kemiğinin arkasında yer alır sonra, 4 mm lancets delmek için submandibular vasküler paket kullanılır. Kan toplandıktan sonra, alanda yer basıncı hematom önlemek için bir alkollü bez kullanarak. Toplanan kan 20 dakika boyunca 2.000 g santrifüj ve -80 ° C&#39;ye kadar saklanır. Adım 3. Post-mortem sonuçlarının toplanması: Hipofiz histopatoloji Fareler genellikle ilk aşıdan sonra 28 gün kurban. EAH tanısı kurmak için gerekli kardinal özellik hipofiz bezi hematopoetik mononükleer hücreler tarafından infiltrasyonu. Fare, CO 2 ile perfüze mühürlü bir plastik odasında yerleştirerek ötenazi . Fareler 8 dakika olmak üzere toplam oda tutulur. Ötenazi sonra, hipofiz bezinin arkadaşı makalede açıklandığı gibi toplanır. Hastalıklı bir hipofiz bezi şişmiş ve çevreleyen dura mater daha sıkıca yapışmış görünüyor. Keskin forseps hipofiz çevreleyen meninksler gevşetmek için kullanılır. Bir kez sfenoid kemik serbestçe hipofiz hamle, hipofiz bezinin bir ucunu forseps ile kavradı ve hipofiz bezinin dikkatli bir şekilde kaldırdı. Bezinin sonra Beckstead fiksatif 5 içeren bir mikrosantrifüj tüp yerleştirilir. Hipofiz bezi, bir gecede sabit mercek kağıdı ile sarılmış ve bir kaset yerleştirilir. Bezleri sonra aşağıdaki protokolü kullanılarak işlenir: <table border="1"><tbody><tr><td> İstasyon Numarası </td><td> Reaktif </td><td> Time Dakika </td><td> Sıcaklık (Celsius) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> % 70 alkol </td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> % 70 alkol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> % 95 alkol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> % 95 alkol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> % 100 alkol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> % 100 alkol </td><td> 7,5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> % 100 alkol </td><td> 7,5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> ksilen </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> ksilen </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> ksilen </td><td&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> parafin </td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> parafin </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td> parafin </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table> Işledikten sonra, hipofiz bezi parafine ve her bezinden en az 5 ardışık olmayan bölümler (5 mikron kalınlığında) kesilir. Bezleri, kesit sonra hematoksilen ve eozin ile boyanmış, ve mononükleer infiltrasyon ölçmek için analiz. En şiddetli infiltrasyon bölümünde puanlama için seçilir. Şiddeti bağışıklık hücreleri tarafından ön hipofiz değiştirme veya imha ölçüde öznel bir tahmine göre atılırsa: derece 0, herhangi bir hastalığı; grade 1,% 2 -20% katılımı; evre 2, 20% -30%; grade 3, 30% -50%; grade 4, 50% -90%; grade 5,% 90 daha fazla. Tüm bölümler bölümleri kaynak kör iki kişi tarafından puanlanır.

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

Dört teknikleri, deney hayvanlarında hipofizitis ikna etmek için bildirilmiştir. Freund s adjuvan ile karışık enjeksiyon hipofiz proteinlerin bu makalede anlatılan tekniği, 1967 6 kadar uzanan en eski ve daha yakın zamanda 1 geliştirilmiştir. Diğer teknikler, 1992 7 çözünür kızamıkçık virüsü glikoproteinler enjeksiyon, 2002 8&#39;de doğrudan hipofiz bezine bir adenovirüs stereotaktik enjeksiyon, ve 2010 9, başka bir sıçan suşu böbrek kapsülü altında bir sıçan suşu h...

<table><tbody><tr><td>SJL fareleri (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>stok 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-Tribrom&amp;#8211;etanol (Avertin)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>Beckstead&amp;rsquo;s fiksatifi</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sjl farelerde deneysel otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Otoimmün hipofizitis, duyarlı farelere 1 içine bir adjuvan ile karışık hipofiz proteinlerin enjeksiyonu ile deneysel olarak üretilebilir . Fare modelleri genellikle insanlarda meydana gelen aynı süreçler iyi bir kopyası sağlayarak, bize hastalıkları nasıl açılmak çalışma izin verir. Tip 1A diyabet gibi bazı otoimmün hastalıklar için, insan meslektaşı benzer bir hastalık kendiliğinden geliştirmek modelleri (NOD fare) vardır. Ancak, diğer pek çok otoimmün hastalıklar için model deneysel olarak ihtiyacı var. Bu konuda ortak bir yaklaşım, çalışılan organ türetilen baskın bir antijen ile fare enjekte edilmesidir. Örneğin, otoimmun tiroidit ilgilenen araştırmacılar tiroglobulin 2 farelere enjekte ve myastenia gravis ilgilenenler asetilkolin reseptörü 3 enjekte. Belirli bir otoimmün hastalık için otoantijen bilinen değilse, araştırmacılar otoimmün reaksiyonu ile hedef organ ham protein ekstresi enjekte. Otoimmün hipofizitis, patojen otoantijen (ler) 4 tanımlanabilir kalır ve böylece ham hipofiz protein hazırlanmasında kullanılır . Bu video makalede SJL farelerde deneysel otoimmün hipofizitis nasıl ikna göstermektedir.

Bu video otoimmün hipofizitis SJL fareler ve histopatoloji ile şiddetini değerlendirmek için nasıl ikna etmek için nasıl gösterir.

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Otoimmün hipofizitis, duyarlı farelere bir adjuvan ile karıştırılmış hipofiz proteinlerinin enjekte edilmesiyle deneysel olarak yeniden üretilebilir1. Fare ...

Otoimmün hipofizit, hipofiz bezinin büyümesi ve bir veya daha fazla hipofiz hormonunun eksikliği ile karakterize edilir. Neden olan otoantijenler hala bilinmemektedir. Eşlik eden video, burada insan otoimmün lenfositik hipofizitine benzer bir fare modeli oluşturmak için kullanılacak olan fare hipofiz immünojeninin hazırlanmasına yönelik bir protokolü göstermektedir.Pitüiter immünojen, duyarlı bir fare soyuna enjekte edilir. Ardından enjeksiyon yedi gün sonra tekrarlanır ve 14 gün sonra biyobelirteç çalışmaları için kan toplanır. 28. günde, sakrifiye edilen farelerden pitüiter bezler hasat edilir; lökosit infiltrasyonunun derecesini belirlemek için kesitler alınır ve boyama yapılır.Otoimmün hipofizit, sella turcica'da ortaya çıkan diğer hormon salgılamayan kitlelerden ayırt edilmesi zor olabilen ve giderek daha fazla tanınan bir hastalıktır. Hastalık yaklaşık 50 yıl önce ilk kez tanımlanmış olsa da, otoimmün hipofizitte hastanın bağışıklık sistemi tarafından tanınan otoantijenler belirsizliğini korumuştur. 2008 yılında, taklit etmek üzere tasarlandığı insan hastalığını yakından yansıtan bir fare modelinin geliştirilmesini yayımladık.Bu fare modeli, rol oynayan hipofiz otoantijenleri

induction-of-experimental-autoimmune-hypophysitis-in-sjl-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T (TEM) lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada, antijen spesifik TEM hücreleri aktive Lewis sıçanlarda evlatlık DTH neden ve inflamatuar yanıt izlemek nasıl göstermektedir.

Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme

Otoimmün hipofizitis fare hipofiz proteinlerin bir özü enjekte farelerde çoğaltılabilir.

Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon Fare Hipofiz İmmunogen hazırlanması

Video, miyelin oligodendrosit glikoproteinleri ve inaktive edilmiş Mycobacterium tuberculosis'in bir kombinasyonunu enjekte ederek bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelit indüksiyonunu göstermektedir. Model, araştırmacıların hastalık mekanizmalarını incelemelerine ve terapötik müdahaleleri test etmelerine olanak tanır.

Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit İndüksiyonu

Bu videoda, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) kullanılarak multipl sklerozun bir fare modeli oluşturulmuştur. Fareye, otoreaktif T hücrelerini aktive eden bir bağışıklık tepkisini tetikleyen bir nöronal peptit ve bir adjuvan içeren bir emülsiyon enjekte edilir. Bunu, otoreaktif T hücrelerinin beyne sızmasına izin vererek kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için bir boğmaca toksini (PTX) enjeksiyonu takip eder. Bu infiltrasyon, multipl sklerozun demiyelinizan durumunu taklit ederek...

BM12 lenfositlerinin bir C57BL/6 alıcısına transferi, sistemik lupus eritematozusun yerleşik bir modelidir. Burada, bu modeli kullanarak hastalığın nasıl başlatılacağını ve T foliküler yardımcı hücrelerin, germinal merkez B hücrelerinin ve plazma hücrelerinin akış sitometrisi ile nasıl karakterize edileceğini açıklıyoruz.

C57BL / 6 FARELERDE SLE bm12 İndüklenebilir Modeli (SLE)

Bu makale, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modelinin indüksiyon ve skorlama yöntemlerini, çeşitli hastalık evrelerinde sırasıyla akış sitometrisi ve kantitatif PCR kullanılarak lenf düğümleri, dalak, kan ve omurilikteki immün hücre dağılımı ve mRNA sitokin seviyelerinin değerlendirilmesi ile birlikte açıklamaktadır.

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Bu raporu başarıyla miyelin protein kullanarak deneysel otoimmün nörite (EAN) sıfır (P0)180-199 peptid Freund'ın tam adjuvan ve boğmaca toksin ile birlikte ikna etmek için basit bir yaklaşım özetlenmektedir. Biz doğru bir şekilde işlevsel açıkları ve bu EAN meydana nevropatoloji ölçüde değerlendirirken yetenekli sofistike bir paradigma mevcut.

C57BL/6 farelerde deneysel otoimmün nörite fonksiyonel ve Neuropathological değerlendirmeler için ikna etmek için basit bir yaklaşım

Bu çalışmada, BALB/c farelerde, bu hastalıkta görülen cinsiyet farklılıkları da dahil olmak üzere ilaca bağlı otoimmün hepatitin patogenezini incelemek için kullanılabilecek bir in vivo immünizasyon, translasyonel hepatit modeli tanımlanmıştır. Bu modelin in vivo ve in vitro deneysel teknikler kullanarak tekrarlanabilir analizleri nasıl gösterdiğini açıklayacağız.

Patojenik Mekanizmalarının İncelenmesi için BALB/c Farelerde İlaca Bağlı, Otoimmün Hepatitin İndüklenmesi

NOD faresinde spontan otoimmün tiroidit olduğu gibi, Hashimoto tiroiditinin çeşitli hayvan modelleri oluşturulmuştur. H-2h4 fareler, HT indüksiyonu için basit ve güvenilir bir modeldir. Bu makalede SAT murin modelinin daha iyi anlaşılması için bu yaklaşım anlatılmakta ve patolojik süreç değerlendirilmektedir.

Bir Fare Spontan Otoimmün Tiroidit Modelinin Oluşturulması

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit, multipl sklerozun en yaygın kullanılan murin modellerinden biridir. Mevcut protokolde, her iki cinsiyetten C57BL / 6J fareleri, miyelin oligodendrosit glikoprotein peptidi ile aşılanır ve bu da esas olarak kuyruk ve uzuvların artan parezi ile sonuçlanır. Burada EAE indüksiyonu ve değerlendirme protokolünü tartışıyoruz.

İki Cinsiyette Multipl Sklerozun Modellenmesi: MOG35-55 ile İndüklenen Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit

Burada, SKG farelerinden CD4 + T hücrelerinin evlat edinilmiş transferi yoluyla bir romatoid artrit (RA) fare modeli oluşturan, immünolojik mekanizmaları, patolojik ilerlemeyi ve RA için yeni tedavilerin geliştirilmesini araştırmak için hızlı ve güvenilir bir deneysel araç sağlayan bir protokol sunuyoruz.

Farelerde Romatoid Artritin Evlat Edinen Bir Transfer Modeli

Öğrenin SJL farelerde deneysel otoimmün hipofizitis indüksiyonu ve histopatolojik analiz yöntemlerini. Bu protokol, insan hastalığına benzeyen bir fare modeli oluşturarak otoimmün bozuklukların patogenezini araştırmaya yardımcı olur.

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Daha fazla video keşfet