Name: Preparação de fatias do hipocampo aguda de ratos e camundongos transgênicos para o Estudo das Alterações Synaptic durante o envelhecimento e amilóide Patologia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00.000+00:00
Duration: 14 min 57 s
Description: Aprenda a preparar fatias agudas do hipocampo de ratos e camundongos transgênicos para estudar alterações sinápticas durante o envelhecimento e patologia amilóide. Este protocolo minimiza danos e permite avaliar função sináptica.

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Trabalho apoiado pelo NIH conceder AG027297, um prêmio do Cabo de Kentucky e Confiança Spinal Injury Research cabeça, e um presente da Fundação Kleberg.

<ol><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase%2Fphosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li>
<li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li>
<li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+%27zipper%27+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca%282%2B%29+channels+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li>
<li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li>
<li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li>
<li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-associated+changes+in+Ca%282%2B%29-dependent+processes%3A+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li>
<li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer%27s+disease%3A+minding+the+store%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li>
<li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li>
<li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li>
<li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li>
<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li>
<li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li>
<li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin%2FNFAT+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li>
<li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+large-conductance+Ca%282%2B%29-activated+K%28%2B%29+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+%28swe%2Find%29+TgCRND8+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li>
<li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity%3A+LTP+and+LTD%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li>
<li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li>
<li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li>
<li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li>
<li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+suppresses+expression+of+long-term+depression+in+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol suppresses expression of long-term depression in aged rats.</a> Brain Res Bull. 53, 783-787 (2000).</li>
<li>Abdul, H. M., Furman, J. L., Sama, M. A., Mathis, D. M., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NFATs+and+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">NFATs and Alzheimer's Disease.</a> Mol Cell Pharmacol. 2, 7-14 (2010).</li>
<li>Abdul, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+decline+in+Alzheimer%27s+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin%2FNFAT+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li>
<li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase%3A+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH%2FNLH+X+PS-1P264L%2FP264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li>
<li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP%2FPS1+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li>
<li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li>
<li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+high+Mg2%2B-to-Ca2%2B+ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li>
<li>Ames, A. 3rd, Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NA%2C+K%2C+CA%2C+MG%2C+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li>
<li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2%2B-induced+Ca2%2B+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li>
<li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+postsynaptic+%5BCa2%2B%5Di+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons%3A+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li>
<li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li>
<li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer%27s-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2%2B+signals+and+altered+membrane+excitability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li>
<li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2%2B+disruptions+in+young%2C+adult%2C+and+aged+Alzheimer%27s+disease+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li>
<li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li>
<li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata%3A+cooperativity+among+coactive+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li>
</ol>

A produção deste vídeo-artigo foi patrocinado pela Leica Microsystems.

Os passos descritos neste protocolo vai ajudar a garantir que dissecações do cérebro são realizadas pelo menos tão rapidamente e eficientemente em idosos, como em ratos adultos jovens. Nós também fornecemos detalhes suficientes para o iniciante a criarem a sua própria fatia estudos sobre LTP e LTD. Se uma maior exploração do envelhecimento e as mudanças AD em função sináptica e plasticidade é um dos seus objetivos, existem pelo menos duas outras questões metodológicas, aludido acima, que merecem análise mais aprofundada. Primeiro, vários laboratórios têm mostrado que o Ca 2 +: Mg2 + taxa em gravação ACSF pode ter um efeito marcante sobre a plasticidade sináptica indução em fatias do hipocampo 2,10,24,25. CSF em mamíferos, o Ca 2 +: Mg2 + taxa é de aproximadamente um (por exemplo, ver 26). No entanto, ACSF Ca 2 +: Mg2 + taxas mais próximas a 2 são comumente usados ​​em estudos fatia de função sináptica e plasticidade. Nos primeiros estudos, esta prática foi provavelmente adaptado para otimizar a indução da LTP e, posteriormente tornou-se rotina para todos os estudos de plasticidade. No entanto, esta prática pode ser problemático em estudos de envelhecimento e AD por causa das diferenças bem caracterizadas em Ca 2 neuronal regulação +. Especificamente, Ca 2 + fluxo e / ou Ca 2 + induzida por Ca 2 +-lançamento é elevada em ratos idosos e / ou camundongos modelo AD durante a ativação neuronal 3,27-31. Indução de LTD é particularmente sensível a mudanças sutis na ACSF Ca 2 + níveis. Nosso protocolo, que usa 2mM Ca 2 + e 2 mM Mg2 +, geralmente resulta em LTD para idosos, mas não jovens animais adultos 2, enquanto que estudos usando um Ca 2 +: Mg2 + relação próxima dos dois, observaram LTD robusta em adultos no ausência de uma diferença de idade 2,10 ou em conjunto com LTD reduzidos em ratos de 32 anos. Estas observações evidenciam a necessidade de considerar cuidadosamente ACSF Ca 2 + e Mg 2 + quando se comparam os níveis de Ca 2 + dependentes de plasticidade em animais adultos idosos e jovens. A segunda questão metodológica diz respeito à forte dependência da LTP na despolarização pós-sináptica 33 e possíveis envelhecimento / genótipo diferenças na força sináptica. Em um experimento de LTP típica, linha de base e LTP a intensidade do estímulo é geralmente ajustada para produzir uma meia máxima (ou três quartos máxima) amplitude EPSP. O problema potencial é que os ratos idosos e APP/PS1 ratos geralmente mostram redução da força sináptica em relação aos seus colegas mais jovens tipo e / ou selvagens, o que significa que os valores EPSP base também será menor em ratos idosos e APP/PS1 camundongos. EPSPs menores podem traduzir para menos despolarização durante a estimulação LTP, resultando em uma menor probabilidade de induzir LTP 33. Devido a isso confundir potencial, é difícil determinar se esses animais apresentam um déficit de transmissão, o déficit de plasticidade, ou ambos. Ou seja, mecanismos de indução de LTP em idade e / ou APP/PS1 ratos podem ser funcionalmente intacto (sem déficit de plasticidade), mas insuficientemente estimuladas (déficit throughput) nessas condições. Esta distinção é fundamental, como mecanismos de transferência e os mecanismos de plasticidade podem responder de forma muito diferente a um tratamento farmacológico específico. Tentamos minimizar o impacto da vazão reduzida na indução de LTP através da normalização da amplitude EPSP ao mesmo nível (por exemplo, 1 mV) em todas as fatias anterior à estimulação LTP. Outras estratégias podem ser eficazes, bem como (por exemplo, utilização de tensão ou pinça de corrente para igualar o potencial de membrana entre os grupos durante a estimulação LTP), e devem ser considerados quando se investiga LTP nestes modelos animais.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Pescador </td><td> BP358-1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Pescador </td><td> BP366-500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (monossódico) </td><td> Sigma </td><td> P5379-100G </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Sigma </td><td> M2643-500G </td></tr><tr><td> CaCl 2 (di) </td><td> Sigma </td><td> C3306-250G </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Pescador </td><td> S233-500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (dextrose) </td><td> Pescador </td><td> BP350-1 </td></tr></tbody></table> Reagentes tabela 1. Necessárias <table border="1"><tbody><tr><td> Nome do equipamento </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Erlenmeyers </td><td> Pescador </td><td> FB-500-2000 FB-500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Aquarium Bubbler </td><td></td><td></td><td> Usado para oxigenar mídia. Disponíveis na maioria das lojas de animais </td></tr><tr><td> 50 copo de vidro mL </td><td> Pescador </td><td> 02-540g </td><td> Para storarge cérebro em ACSF </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Pescador </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Guilhotina de Pequenos Animais </td><td> Mundial Precision Instruments (WPI) </td><td> DCAP-M </td><td></td></tr><tr><td> Toalha de papel plano </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # Feather lâmina cirúrgica 11 </td><td> Pescador </td><td> 08-916-5B </td><td></td></tr><tr><td> Beebee osso tesoura </td><td> Multa Ferramentas da Ciência (FST) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Lempert Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8321 </td><td> Use para ratos </td></tr><tr><td> Friedman-Pearson Rongeurs </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> Use para camundongos ou ratos </td></tr><tr><td> Ferramenta hipocampo </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> Colher </td><td></td><td></td><td> Uma colher de chá vai fazer plástica </td></tr><tr><td> Espátula </td><td> Pescador </td><td> 21-401-25A </td><td> Espátula </td></tr><tr><td> Cirúrgica da íris tesoura </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> plástico pipetas de transferência </td><td> Pescador </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110 milímetros de papel de filtro Whatman </td><td> Pescador </td><td> 09-805E </td><td> Whatman cat. 1001-110 </td></tr><tr><td> Placa de Petri de vidro </td><td> Pescador </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica VT1000P manual vibratório micrótomo </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Lâmina de 0,1 milímetros FA-10 Feather S </td><td> Ted Pella </td><td> 121-9 </td><td> Lâmina de 0,1 milímetros FA-10 Feather S </td></tr><tr><td> Vidro borosilicato Pipetar Pasteur (com bulbo de borracha) </td><td> Pescador </td><td> 13-678-20A </td><td> Para a transferência de fatias: Dica está quebrado e calor polida para maior abertura </td></tr><tr><td> 35 prato de Cultura milímetros Polysterine </td><td> Corning </td><td> 430588 </td><td> Utilizado para a recolha de cortes após a dissecção </td></tr></tbody></table> Tabela 2. Ferramentas e materiais para dissecção <table border="1"><tbody><tr><td> Equipamentos / materiais </td><td> Companhia </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Segurando câmara </td><td> Custom Built </td><td></td></tr><tr><td> P-97 Horizontal Pipetar Puller </td><td> Sutter Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Mesa de isolamento de vibração </td><td> Técnico Manufacturing Corporation (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> Gaiola de Faraday </td><td> Personalizado construído </td><td></td></tr><tr><td> Pyrex Garrafa Aspirador com Sidearm Inferior (Produto # 1220-1E) </td><td> Corning </td><td></td></tr><tr><td> Gravidade contolled set IV com regulador (Produto # 2C8891) </td><td> Baxter </td><td></td></tr><tr><td> Linha de Aspiração Central </td><td></td><td> Disponível na maioria dos laboratórios modernos </td></tr><tr><td> 95% O 2 / 5% CO 2 Gas Mix </td><td> Escocêst-Gross Co. </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM tubulação Lab Para O 2 / CO 2 de entrega </td><td> Fisher Scientific </td><td> Não-tóxica, não-oxidantes, vem em uma variedade de tamanhos. </td></tr><tr><td> Microscópio Eclipse E600FN </td><td> Nikon </td><td> com os objetivos de 10x e 40x, perto do filtro infared e GFP, DS-Red2 filtros </td></tr><tr><td> Legal snap ES Câmera Digital </td><td> Fotométricos </td><td> Legal snap ES Câmera Digital </td></tr><tr><td> X-Cite Iluminador Fluorescente </td><td> EXFO </td><td> X-Cite Iluminador Fluorescente </td></tr><tr><td> Plataforma microscópio </td><td> Siskiyou </td><td> Personalizado montado </td></tr><tr><td> RC-22 submersíveis de gravação da câmara (Produto # 64-0228) </td><td> Warner Instruments (WI) </td><td> Requer P-1 adaptador de plataforma e palco (Produto # 64-0277 De Warner) </td></tr><tr><td> TC2BIP controlador de temperatura 2/3Ch </td><td> Microcontrols celular </td><td> TC2BIP controlador de temperatura 2/3Ch </td></tr><tr><td> 4 Axis manipulador Miniature manual </td><td> Siskiyou </td><td></td></tr><tr><td> Fio de platina Iridium (0,002 in) (Item # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 Isolator Stimulus </td><td> WPI </td><td> A365 Isolator Stimulus </td></tr><tr><td> Multiclamp Amplificador 700B </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Digidata 1322A conversor A / D </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Software PClamp </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Computador pessoal (Pentium 4) </td><td> Dell </td><td></td></tr></tbody></table> Tabela 3. Eletrofisiologia equipamentos e materiais

preparação de fatias do hipocampo aguda de ratos e camundongos transgênicos para o estudo das alterações synaptic durante o envelhecimento e amilóide patologia

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

O roedor preparação fatia do hipocampo é talvez a ferramenta mais amplamente utilizado para investigar função sináptica mamíferos e plasticidade. O hipocampo pode ser extraído de forma rápida e facilmente de ratos e camundongos e fatias de permanecer viável por horas em oxigenado líquido cefalorraquidiano artificial. Além disso, técnicas básicas electrophysisologic são facilmente aplicadas à investigação da função sináptica em fatias do hipocampo e forneceram algumas das melhores biomarcadores para deficiências cognitivas. A fatia do hipocampo é especialmente popular para o estudo de mecanismos de plasticidade sináptica envolvida na aprendizagem e memória. Mudanças na indução de potenciação de longa duração e depressão (LTP e LTD) da eficácia sináptica em fatias do hipocampo (ou falta dele) são freqüentemente usados ​​para descrever o fenótipo neurológico de animais com deficiência cognitiva e / ou para avaliar o mecanismo de ação da compostos nootropic. Este artigo descreve os procedimentos que usamos para preparar fatias do hipocampo de ratos e camundongos transgênicos para o estudo de alterações sinápticas do cérebro associadas com o envelhecimento ea doença de Alzheimer (AD) 1-3. Uso de ratos e camundongos com idade modelo AD pode apresentar um conjunto único de desafios para os pesquisadores acostumados a usar ratos mais jovens e / ou ratos em suas pesquisas. Ratos idosos têm crânios mais espessa e mais resistente do tecido conjuntivo de ratos mais jovens e camundongos, o que pode atrasar extração de cérebro e / ou dissecção e, conseqüentemente, negar ou exagerar verdadeira idade diferenças na função sináptica e plasticidade. Envelhecimento e patologia amilóide também pode agravar a lesão do hipocampo sustentada durante o processo de dissecação, novamente complicando qualquer inferências a partir da avaliação fisiológica. Aqui, discutimos as medidas tomadas durante o processo de dissecção para minimizar esses problemas. Exemplos de respostas sinápticas adquiridos em &quot;saudável&quot; e &quot;insalubre&quot; fatias de ratos e camundongos são fornecidos, bem como representante experimentos plasticidade sináptica. O possível impacto de outros fatores metodológicos sobre a função sináptica nestes modelos animais (por exemplo, componentes de gravação solução, parâmetros de estimulação) também são discutidos. Embora o foco deste artigo é sobre o uso de ratos idosos e camundongos transgênicos, os novatos para cortar fisiologia deve encontrar detalhes suficientes aqui para começar a fazer seus próprios estudos, usando uma variedade de modelos de roedores.

Este artigo descreve procedimentos para preparar fatias do hipocampo de ratos e camundongos transgênicos para o estudo de alterações sinápticas do cérebro associadas ao envelhecimento e relacionadas com a idade as doenças neurodegenerativas, como doença de Alzheimer.

Preparação de fatias do hipocampo aguda de ratos e camundongos transgênicos para o Estudo das Alterações Synaptic durante o envelhecimento e amilóide Patologia

A preparação de fatias hipocampais de roedores é, talvez, a ferramenta mais amplamente utilizada para investigar a função e a plasticidade sináptica em mamíferos. A ...

Os cortes do hipocampo de roedores são frequentemente utilizados no estudo da função e plasticidade sináptica de mamíferos. Aqui demonstramos um protocolo para obtenção e estudo de cortes de ratos e camundongos idosos, que possuem crânios mais espessos e tecido conjuntivo mais resistente do que ratos e camundongos jovens. Essas características podem atrasar a extração ou a dissecação do cérebro e, consequentemente, anular ou exagerar diferenças reais relacionadas à idade na função e plasticidade sináptica.Além disso, o envelhecimento e a patologia amiloide podem agravar os danos hipocampais sofridos durante o procedimento de dissecação, complicando ainda mais as inferências obtidas a partir da avaliação fisiológica. Nesta demonstração, discutimos os passos realizados durante os procedimentos de extração e dissecação para minimizar esses problemas. Primeiramente, o cérebro é rapidamente extraído e colocado em fluido espinhal cerebral artificial frio, com baixo teor de cálcio e mantido em gelo.Os hipocampos são então cuidadosamente removidos em uma plataforma de dissecção gelada, e fatias hipocampais são preparadas usando um vibrátomo e incubadas em um LCR contendo cálcio e oxigenado. Por fim, potenciais e correntes sinápticas são evocados em múltiplas sub-regiões hipocampais e registrados; os resultados obtidos demonstram os efeitos do envelhecimento e/ou da patologia semelhante à doença de Alzheimer sobre a função e plasticidade sináptica. O uso adequado desta técnica tem implicações para o declínio cognitivo relacionado à idade e a demência devido à doença de Alzheimer.Isso ocorre porque a disfunção sináptica está entre os primeiros biomarcadores desses sintomas clínicos, demonstrando este procedimento. Hoje será o Dr. Chris Norris, o pesquisador principal do laboratório, ao lado de uma pia grande. Prepare a área de dissecação para a remoção do cérebro e a dissecação do hipocampo.Inclua uma toalha de papel dobrada, uma lâmina de bisturi número 11, tesoura BB, pinças para osso, uma ferramenta para hipocampo, uma espátula dupla especializada da fine surgical tool. Coloque também tesoura cirúrgica pequena, uma espátula fina, pipeta de plástico, papel de filtro Watman, uma placa de Petri de vidro de 100 milímetros cheia de gelo, uma colher de plástico e um béquer com solução livre de cálcio parcialmente descongelada. Uma CSF coberta com param.Após a decapitação da rata. O cérebro deve ser extraído o mais rapidamente possível. Coloque a cabeça sobre a toalha de papel e, com o bisturi, faça rapidamente uma incisão no meio do couro cabeludo, indo do osso nasal até o osso occipital.Certifique-se de cortar completamente o músculo cutâneo, expondo totalmente as suturas do crânio. Segure a cabeça firmemente e corte as placas occipital, parietal e frontal ao longo da sutura mediana. Certifique-se de manter a lâmina inferior da tesoura firmemente encostada na superfície interna do crânio e afastada do cérebro.Isso é essencial para evitar arranhões acidentais. Próximo slide. Os alicates Ron devem ser posicionados sob a placa parietal esquerda e as mandíbulas devem ser comprimidas juntas, movendo-se para cima e para frente para puxar as placas parietal e occipital para longe.Se necessário, use os alicates Ron para remover também a placa frontal esquerda. Repita o procedimento para o outro hemisfério. Uma vez deslocadas as placas, use alicates Ron ou tesoura para puxar suavemente ou cortar qualquer dura-máter que possa estar aderida às placas temporais e estendida sobre a superfície do cérebro.Agora deslize os afastadores Ron entre o cérebro e a placa temporal direita, mantendo a pressão em direção ao crânio e afastada do cérebro. Aperte e gire a placa temporal para longe até ouvir ou sentir um estalo. Repita o procedimento para o lado esquerdo.Deslize a espátula larga à frente da ferramenta para hipocampo entre a superfície ventral do cérebro e as placas ósseas inferiores do crânio até que ela esteja completamente sob o cérebro. Mova-a lateralmente de um lado para o outro e para frente e para trás algumas vezes para seccionar os nervos cranianos intactos utilizando a ferramenta para hipocampo. Retire o cérebro com a espátula e submerja-o em solução A CSF livre de cálcio coberta com Parfum, deixando esfriar por cerca de um minuto.Para extrair os hipocampos, use uma colher para retirar o cérebro do LCR e coloque-o sobre um papel Watman umedecido com LCR, posicionado na tampa de uma placa de Petri gelada. Usando a lâmina do bisturi, remova o cerebelo e aproximadamente um quarto dos lobos frontais rostrais. Em seguida, corte ao longo da fissura inter-hemisférica para separar completamente os dois hemisférios.Coloque um hemisfério de volta na mistura de LCR e posicione o outro sobre a plataforma de dissecação, de modo que o plano coronal do lobo frontal esteja voltado para baixo; o tronco encefálico branco e o mesencéfalo devem ser facilmente diferenciados do córtex sobrejacente, de cor rosa ou acinzentada. Localize os colículos no mesencéfalo. Eles terão aparência de dois pequenos nódulos brancos e estarão localizados no topo do cérebro.Nesta orientação, segure suavemente o mesencéfalo no lugar com a tesoura e deslize a espátula entre os córtices e o tálamo. Em seguida, puxe delicadamente o bulbo raquidiano, o mesencéfalo e o tálamo para longe. Pode ser necessário cortar tecido conjuntivo ou vasculatura com a tesoura.Use a borda afiada da espátula para seccionar o fórnice, um feixe de fibras brancas localizado na porção dorsal anterior do hipocampo. Com a tesoura, continue suavemente puxando o tronco encefálico, o mesencéfalo e o tálamo, sem seccioná-los completamente do restante do cérebro.A lâmina branca de fibras que forma uma hipérbole rasa na parte inferior do hipocampo deve agora estar visível nesta orientação. Usando a pipeta de transferência, borrife suavemente um pouco de ACSF na fenda sob a FIA para ajudar a separar o hipocampo do córtex. Deslize suavemente a espátula nessa fenda e, segurando firmemente o tronco encefálico, o mesencéfalo e o tálamo com a tesoura, gire suavemente o hipocampo e corte cuidadosamente qualquer restante de córtex, vasos sanguíneos e substância branca que ainda esteja aderido ao hipocampo.Enxágue com alguns mililitros de LCR A. Usando a pipeta de transferência, mantenha o tecido úmido e frio com uma pasta de LCR. Em seguida, remova o outro hemisfério e repita a dissecação para seccionar os hipocampos de rato.Encha o reservatório do vibrátomo com ACSF gelado e livre de cálcio, de modo que o estágio de corte e a lâmina fiquem completamente submersos. Use um bisturi para remover as pontas rostral e caudal de cada hipocampo e posicione-as juntas pelas superfícies rostrais, com o giro denteado de cada hipocampo voltado um para o outro. Cole o tecido cerebral em um bloco de montagem e transfira-o para o estágio de corte do vibrátomo.Para experimentos de fisiologia sináptica, recomenda-se seções de 400 micrômetros. Usando uma pipeta de transferência de boca larga, transfira as fatias para um pequeno recipiente de Petri contendo solução artificial cerebrospinal (CSF) sem cálcio e gelada.Após a conclusão do fatiamento, as fatias são transferidas para a câmara de armazenamento, preenchida com A CSF contendo cálcio e oxigenado. Aumente gradualmente a temperatura da câmara de 27 para 32 graus Celsius para realizar gravações extracelulares básicas. Em fatias agudas, a câmara de gravação é posicionada sobre a platina do microscópio, de modo que o A CSF pré-aquecido é conduzido por gravidade através de um regulador de fluxo e removido por uma linha central de vácuo.Usando um pincel pequeno, transfira uma fatia para a câmara de registro de modo que ela fique submersa em A CSF e apoiada na tela inserida. Deixe a fatia aclimatar-se por 10 a 15 minutos. Enquanto a fatia está se aclimatando, ligue o estimulador ou isolador de estímulo e regule a saída para zero.Em seguida, posicione um eletrodo estimulador sobre a fatia na região do estrato radiatum do CA2 próximo à borda do CA3. Introduza o eletrodo de registro no estrato radiatum do CA1, apenas rompendo a superfície da fatia. Aumente a saída do estimulador para um nível moderado aqui.O isolador de estímulo é ajustado em cerca de 150 microampères. Abaixe lentamente o eletrodo de estimulação em pequenos intervalos até que um artefato de estímulo seja registrado. Em CA um, continue abaixando lentamente ambos os eletrodos, o de estimulação e o de registro, em intervalos, enquanto adquire as respostas de CA um.Estabeleça uma curva de força sináptica até que as amplitudes do volete de fibra e do potencial pós-sináptico excitatório atinjam níveis máximos utilizando um programa de aquisição de software como o Clampex. Em seguida, use o software para aplicar estímulos em uma variedade de intensidades e registre a atividade correspondente no CA1. A amplitude e o número de níveis de intensidade do estímulo utilizados devem ser suficientes para gerar uma curva sigmoide quando plotados em relação aos valores de FV ou EPSP.A seguir, para investigar a plasticidade sináptica, reajuste a intensidade do estímulo para cada fatia de modo que seja elicitada uma resposta de um milivolt. Inicie a estimulação de linha de base com uma frequência de 0,033 hertz do potencial pós-sináptico excitatório (EPSP). Os valores da inclinação devem permanecer estáveis por pelo menos 20 minutos antes da indução da potenciação de longa duração (LTP) ou da depressão de longa duração (LTD).Para registrar um período de linha de base, utilize um arquivo de parâmetro clamp X para estimular e registrar a cada 30 segundos. Em seguida, para induzir a PTL, abra um arquivo de parâmetro separado para induzir a PTL usando um trem de estímulos de 100 hertz por um segundo ou múltiplos estímulos curtos de 200 hertz aplicados a cada 200 milissegundos para a indução da DLT. Aplique 900 pulsos de estímulo a uma taxa de um hertz.Após as séries de estímulos retornarem ao arquivo de parâmetros de linha de base, colete respostas sinápticas por 60 minutos ou mais. Compare os valores da inclinação do PEPS obtidos antes e 60 minutos após a estimulação de alta ou baixa frequência para determinar a presença de PTP, indicada pelo aumento da força sináptica, ou de DTP, indicada pela diminuição da força sináptica. Acredita-se amplamente que ambos os processos reflitam mecanismos críticos para aprendizado e memória.Aqui, são apresentadas curvas representativas de força sináptica de dois cortes hipocampais diferentes de dois camundongos A PP PS.One. Um camundongo foi tratado com um novo reagente viral adeno-associado anti-inflamatório. O outro foi tratado com um reagente viral controlado.Como pode ser observado quando um número semelhante de fibras pré-sinápticas é ativado entre as condições experimentais. Quando os grupos apresentam amplitudes de FV semelhantes, conforme indicado no eixo x, a curva do corte tratado com o reagente a é deslocada para a esquerda, indicando maiores amplitudes de EPSP. Esses dados demonstram que a força sináptica basal é maior no corte tratado com o reagente a.Aqui estão os resultados de experimentos de PTL realizados nos mesmos cortes. Observe que os valores da inclinação do PEPS no corte com o reagente A são muito maiores em relação ao corte controle durante a linha de base de uma hora após a aplicação da estimulação de 100 hertz, indicando que a PTL estava presente no corte com o reagente A, mas não no corte controle. Esta figura mostra como eram as formas de onda do PEPS nos cortes de camundongo com o reagente A e controle antes e 60 minutos após a aplicação da estimulação de 100 hertz.O aumento na inclinação do PEPS no período pós-100 hertz é muito evidente no corte com o reagente A, indicativo de PLT conjunta. Os experimentos nas figuras apresentadas até agora indicam que o reagente A aumenta a força sináptica e melhora os déficits de PLT. Em camundongos PP PS um, experimentos semelhantes foram realizados em LACS hipocampais de ratos idosos.Aqui, são apresentadas as curvas de força sináptica de dois fragmentos hipocampais diferentes de uma rata tratada com uma nova droga anti-inflamatória e de outra rata tratada com o reagente controle veicular. Observe que essas curvas são muito semelhantes nos dois fragmentos, indicando que a droga A tem pouco efeito sobre a força sináptica basal. Esta figura mostra os resultados de experimentos de LTD realizados nos mesmos fragmentos.Observe que, em ratos idosos, os valores da inclinação do PEPS na fatia tratada com veículo estão reduzidos na linha de base de uma hora após a aplicação de uma estimulação de um hertz. No entanto, os valores da inclinação do PEPS na fatia tratada com a droga A mostram pouca ou nenhuma depressão, indicando a ausência de DLT. Aqui são mostradas as formas de onda do PEPS de fatias de ratos tratados com a droga A e com veículo antes e 60 minutos após a aplicação da estimulação de um hertz. A diminuição da inclinação do PEPS no período pós-um-hertz é muito evidente na fatia tratada com veículo, mas não na fatia tratada com a droga A.Os resultados nestas figuras mostram que a droga a melhora as diferenças de plasticidade em ratos idosos ao bloquear a indução da DLT, mas não afeta a função sináptica basal. Esses dados mostram que múltiplos parâmetros da função sináptica e plasticidade em ratos idosos e camundongos modelo de Alzheimer podem ser modulados por tratamentos experimentais e destacam a utilidade de fatias hipocampais agudas para investigar o potencial nootrópico e/ou neuroprotetor de novas drogas e reagentes experimentais. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar-se de equilibrar a velocidade na extração do cérebro com a precisão e delicadeza na dissecação, corte e manipulação do hipocampo para medidas eletrofisiológicas.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Uma característica da doença de Alzheimer é a elevação da...

Preparação de Oligoméricas β-amilóide 1-42 Indução e de Impairment plasticidade sináptica em fatias do hipocampo

Fonte: McLeod, F., et al. Avaliação da densidade de sinapses em fatias de cérebro de roedores hipocampais. J. Vis. Exp. (2017). Este vídeo demonstra um método para visualizar marcadores sinápticos em fatias cerebrais do hipocampo usando análise de imunofluorescência confocal. As fatias são imunomarcadas com anticorpos primários direcionados a marcadores pré-sinápticos e pós-sinápticos, seguidos por anticorpos secundários conjugados com fluoróforo. Os marcadores marcados são então visualizados...

Análise microscópica de sinapses em fatias de hipocampo de camundongos usando imunofluorescência

Este trabalho apresenta uma metodologia completa para se preparar e...

Melhoria da preparação e preservação de fatias do hipocampo de camundongos para uma gravação muito estável e reprodutível de potenciação de longa duração

Este artigo em vídeo descreve procedimentos experimentais para estudar a plasticidade de longo prazo e seus processos associativos, como marcação sináptica, captura e marcação cruzada nos neurônios piramidais CA1 usando fatias agudas do hipocampo de roedores.

Investigação de Synaptic Tagging / Captura e-captura Cruz usando aguda fatias do hipocampo de roedores

Este protocolo demonstra a implementação de um otimizado N-metil-D-glucamine (NMDG) método de recuperação protetora de preparação de fatia do cérebro. Uma formulação única mídia é usada para obter confiavelmente fatias de cérebro saudável de animais de qualquer idade e para diversas aplicações experimentais.

Preparação de fatias de cérebro aguda usando um otimizado N-metil-D-método de proteção de recuperação glucamine

Este protocolo descreve a estabilização do nível de oxigênio em um pequeno volume de tampão reciclado e aspectos metodológicos da plasticidade sináptica dependente de atividade de gravação em fatias hippocampal agudas submersas.

Gravação de plasticidade sináptica em fatias Hippocampal agudas, mantidas em um pequeno volume reciclagem - perfusão- e sistema de câmara de submersão-tipo

Um protocolo para com precisão, identificando e analisando as sinapses em fatias hippocampal usando a imunofluorescência é descrito neste artigo.

Avaliação da densidade de sinapse em fatias Hippocampal cérebro de roedor

Este é um protocolo para preparação aguda de fatias de hipocampi de camundongos adultos e envelhecidos que se aproveita da perfusão transcárrica e corte de fatias com NMDG-aCSF gelado para reduzir danos hipóxicos ao tecido. As fatias resultantes permanecem saudáveis durante muitas horas, e são adequadas para grampos de remendo de longo prazo e gravações de campo.

Minimizando a hipóxia em fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos

Este artigo tem como objetivo descrever um protocolo sistemático para obter fatias cerebrais hipocampais horizontais em camundongos. O objetivo desta metodologia é preservar a integridade das vias de fibra hipocampal, como o caminho perfurante e o trato de fibra de musgo para avaliar processos neurológicos relacionados ao giro dento.

Fatias hipocampais horizontais do cérebro do rato

Apresentamos um protocolo para preparar fatias agudas do hipocampo dorsal-intermediário de camundongos. Comparamos esta preparação transversal com o corte coronal em termos de qualidade de gravações e preservação de características morfológicas de neurônios registrados.

Preparação de fatias agudas do hipocampo dorsal para gravação de células inteiras e reconstrução neuronal no giro dentado de camundongos adultos

Aprenda a preparar fatias agudas do hipocampo de ratos e camundongos transgênicos para estudar alterações sinápticas durante o envelhecimento e patologia amilóide. Este protocolo minimiza danos e permite avaliar função sináptica.

Preparação de fatias do hipocampo aguda de ratos e camundongos transgênicos para o Estudo das Alterações Synaptic durante o envelhecimento e amilóide Patologia (Vídeo) | JoVE Journal

Preparação de fatias do hipocampo aguda de ratos e camundongos transgênicos para o Estudo das Alterações Synaptic durante o envelhecimento e amilóide Patologia

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