JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 1:30 min • March 4th, 2025
Comece com uma fatia cerebral coronal pré-fixada, desparafinizada e reidratada contendo neurônios submetidos à apoptose, caracterizada por morte celular e fragmentação do DNA.
Para detectar a morte celular apoptótica usando o ensaio TUNEL, trate a fatia do cérebro com a enzima proteinase-K.
A proteinase-K entra nos neurônios e inativa as DNases, impedindo a degradação do DNA.
Enxágue a fatia para remover quaisquer enzimas residuais.
Adicione um tampão contendo trifosfatos de desoxiuridina marcados com corante fluorescente, ou dUTPs, e a desoxinucleotidil transferase terminal, ou enzima TdT, e incube.
Em neurônios apoptóticos com fragmentos de DNA abundantes, a enzima TdT liga esses dUTPs fluorescentes aos grupos 3'-hidroxila livres dos fragmentos de DNA.
Em contraste, o DNA de neurônios saudáveis permanece sem rótulo.
Manchar o tecido com DAPI, um corante nuclear que se liga ao DNA em neurônios saudáveis e apoptóticos, colorindo seus núcleos de azul.
Após a visualização, os neurônios contendo fluorescência azul e verde confirmam a morte celular apoptótica no tecido cerebral.