Detecção de proteínas virais no tecido cerebral de camundongos infectados pelo vírus da raiva

Colete seções cerebrais fixas de camundongos infectados pelo vírus da raiva intracerebral em intervalos post-mortem definidos.

O vírus infecta neurônios piramidais no córtex cerebral e proteínas virais expressas localizam-se dentro de estruturas granulares intracitoplasmáticas conhecidas como corpos de inclusão.

Trate as seções com cloreto de amônio para neutralizar os grupos reativos induzidos pela fixação e minimizar a coloração de fundo.

Mergulhe as seções em peróxido de hidrogênio para inativar a peroxidase endógena e reduzir os sinais inespecíficos.

Aplique uma solução de bloqueio contendo um detergente para permeabilizar as membranas celulares e mascarar locais de ligação inespecíficos.

Incubar com anticorpos primários específicos para as proteínas virais.

Lave e incube com anticorpos secundários conjugados com biotina que se ligam aos anticorpos primários.

Lave novamente e introduza a avidina conjugada com enzima peroxidase, que se liga à biotina, seguida por um substrato cromogênico que a enzima converte em um produto colorido.

Visualize os corpos de inclusão imunorreativos contendo proteínas virais usando um microscópio.

Com o aumento do tempo post-mortem, a degradação neuronal e o desaparecimento dos corpos de inclusão tornam-se evidentes.