Microscopia Eletrônica de Transmissão de Grânulos de Lipofuscina em Neurônios

Comece com o tecido cortical prefixado, onde os neurônios contêm grânulos de lipofuscina. Esses grânulos ricos em lipídios se acumulam com o envelhecimento e estão associados a condições neuropatológicas.

Trate o tecido com tetróxido de ósmio para estabilizar as estruturas celulares, incluindo a lipofuscina.

Trate o tecido com concentrações crescentes de etanol para desidratá-lo. Em seguida, incorpore-o em resina e corte seções ultrafinas para revelar estruturas neuronais.

Monte a seção em uma grade de cobre não revestida.

Manchar a seção com acetato de uranila, uma mancha de metal pesado.

Os íons uranilo interagem com biomoléculas celulares, incluindo lipídios, proteínas e DNA.

Em seguida, core o tecido com citrato de chumbo, que interage fracamente com íons de uranila pré-ligados, aumentando o contraste contra o fundo.

Coloque a fatia corada sob um microscópio eletrônico de transmissão para expô-la a um feixe de elétrons focalizado.

Biomoléculas coradas enriquecidas com manchas de metais pesados, espalham elétrons fortemente em comparação com o fundo.

Os grânulos de lipofuscina aparecem como aglomerados irregulares e densos contra o fundo citoplasmático mais claro, confirmando su