Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:25 min. • March 4th, 2025
Pegue seções fixas do nervo óptico de um rato controle e um rato com lesão do nervo óptico.
A seção de controle exibe axônios com bainhas de mielina compactadas contendo camadas concêntricas de membrana plasmática. A seção lesada exibe mielina descompactada com grandes lacunas.
Incubar com um complexo de ósmio-ferrocianeto que se liga aos lipídios e aumenta o contraste da bainha de mielina.
Trate com tiocarbohidrazida para criar locais de ligação adicionais para o ósmio.
Reaplique o ósmio para aumentar ainda mais o contraste lipídico.
Mancha com metais pesados, que se ligam a macromoléculas e aumentam o contraste estrutural.
Desidrate usando concentrações crescentes de álcool e enxágue com acetona para inclusão de resina.
Incorpore o tecido em resina e cubra a resina com ouro para melhorar a qualidade da imagem.
Use microscopia eletrônica de varredura de face de bloco serial para fatiar e criar imagens simultaneamente. Focalize o feixe de elétrons na superfície e detecte os elétrons retroespalhados para gerar imagens.
As bainhas de mielina parecem escuras, enquanto os espaços dentro das bainhas danificadas parecem mais claros, permitindo a diferenciação entre mielina normal e danificada.