JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 1:25 min • March 4th, 2025
Pegue seções fixas do nervo óptico de um rato controle e um rato com lesão do nervo óptico.
A seção de controle exibe axônios com bainhas de mielina compactadas contendo camadas concêntricas de membrana plasmática. A seção lesada exibe mielina descompactada com grandes lacunas.
Incubar com um complexo de ósmio-ferrocianeto que se liga aos lipídios e aumenta o contraste da bainha de mielina.
Trate com tiocarbohidrazida para criar locais de ligação adicionais para o ósmio.
Reaplique o ósmio para aumentar ainda mais o contraste lipídico.
Mancha com metais pesados, que se ligam a macromoléculas e aumentam o contraste estrutural.
Desidrate usando concentrações crescentes de álcool e enxágue com acetona para inclusão de resina.
Incorpore o tecido em resina e cubra a resina com ouro para melhorar a qualidade da imagem.
Use microscopia eletrônica de varredura de face de bloco serial para fatiar e criar imagens simultaneamente. Focalize o feixe de elétrons na superfície e detecte os elétrons retroespalhados para gerar imagens.
As bainhas de mielina parecem escuras, enquanto os espaços dentro das bainhas danificadas parecem mais claros, permitindo a diferenciação entre mielina normal e danificada.
Este estudo investiga as diferenças estruturais nas bainhas de mielina entre seções do nervo óptico controle e lesadas, utilizando técnicas avançadas de imagem. Os resultados destacam o impacto da lesão na integridade da mielina.
A microscopia eletrônica de alta resolução da integridade da mielina em modelos de lesão do nervo óptico fornece pontos finais estruturais críticos para estudos iniciais de neurodegeneração. A diferenciação quantitativa entre mielina normal e danificada apoia a redução de riscos mecanicistas e orienta a validação de alvos na descoberta de fármacos para o sistema nervoso central. Essas saídas de imagem permitem decisões seguras sobre o avanço nas etapas terapêuticas de neuroproteção e remielinização.
Este fluxo de trabalho de microscopia eletrônica integra-se ao continuum de descoberta a pré-clínico para programas de lesão e reparo do sistema nervoso central.
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Última atualização: 29 agosto 2026