Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:30 min. • March 4th, 2025
Pegue um rato submetido a fluxo sanguíneo restrito para o hemisfério direito do cérebro, resultando em danos à BHE.
Injete albumina marcada com fluoróforo por via intravenosa, que atravessa a BHE danificada, atingindo o cérebro.
Obtenha seções cerebrais quimicamente fixadas.
Adicione tampão de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Aplique anticorpos conjugados com peroxidase direcionados à albumina marcada com fluoróforo.
Adicione um substrato cromogênico, que a peroxidase converte em um precipitado denso em elétrons.
Introduza o tetróxido de ósmio para fixar os lipídios da membrana e aumentar o contraste.
Desidrate as seções com concentrações crescentes de álcool.
Adicione acetato de uranila, que se liga a ácidos nucléicos e proteínas para aumentar o contraste.
Desidratar novamente com concentrações crescentes de álcool, finalizando com óxido de propileno para inclusão de resina. Incorpore as seções em resina.
Identifique e excise microscopicamente as regiões coradas com cromogênio.
Reincorpore essas seções em resina e prepare fatias ultrafinas.
Monte as fatias em grades de microscopia eletrônica (EM).
Coloração com citrato de chumbo para melhorar o contraste da matriz extracelular.
Prossiga com o EM para examinar a integridade do BBB.