JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 1:30 min • March 4th, 2025
Pegue um tecido cerebral humano fixado em formalina embebido em parafina. O tecido exibe micróbios patogênicos presentes tanto dentro das células quanto extracelularmente.
Lave para remover a parafina e, em seguida, reidrate o tecido usando concentrações decrescentes de álcool.
Aqueça com um tampão ácido para quebrar as ligações cruzadas de proteínas induzidas pela formalina, desmascarando epítopos antigênicos nas bactérias.
Incubar com cloreto de amônio para neutralizar os grupos aldeídos reativos residuais formados durante a fixação, evitando a interação inespecífica com anticorpos.
Trate com um detergente para permeabilizar as membranas celulares, facilitando a penetração de anticorpos.
Aplique uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Incubar com anticorpos primários que têm como alvo micróbios extracelulares e intracelulares.
Aplique anticorpos secundários conjugados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.
Adicione um corante fluorescente de ligação ao DNA para corar os núcleos.
Trate com um eliminador de autofluorescência para extinguir a fluorescência dos grânulos intracelulares autofluorescentes, minimizando os sinais de fundo.
Usando microscopia de fluorescência, examine o tecido para confirmar a presença de micróbios.