Detecção de proteínas Tau fosforiladas em amostras de cérebro de camundongos usando análise de Western Blot

Comece com um tecido cerebral de camundongo em um tampão de extração contendo inibidores de protease e um detergente.

Homogeneizar o tecido para liberar proteínas no tampão. Os inibidores de protease bloqueiam a atividade da protease, impedindo a degradação da proteína.

Centrifugar e recolher o sobrenadante com proteínas.

Adicione um tampão de carregamento contendo detergente e um agente redutor para desnaturar a proteína.

Carregue as proteínas do controle e a amostra em um gel SDS-PAGE. Aplique um campo elétrico para separar proteínas em bandas distintas.

Após a eletroforese, transfira as bandas de proteínas para uma membrana.

Trate a membrana com um tampão contendo leite sem gordura para bloquear locais de interação não específicos.

Incubar com anticorpos primários que se ligam especificamente a proteínas tau fosforiladas.

Lave e incube com anticorpos secundários conjugados com enzimas.

Adicione um substrato que reaja com a enzima para produzir um sinal de luz, confirmando as proteínas tau fosforiladas.

Uma faixa luminosa intensa na amostra em comparação com o controle sugere patologia neurodegenerativa.