Detecção de alfa-sinucleína fosforilada usando Western Blotting

0 vistas1:30 min • March 4th, 2025

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Comece com proteínas do LCR, incluindo alfa-sinucleína fosforilada, um biomarcador de doenças neurodegenerativas.

Adicione um tampão de carregamento contendo um detergente, um agente redutor e um corante de rastreamento.

Aqueça para desnaturar as proteínas e, em seguida, coloque-as em um gel SDS-PAGE.

Realize eletroforese para separar as proteínas por peso molecular em bandas distintas.

Incube o gel em um tampão de blotting com agitação.

Em seguida, transfira eletro-as bandas de proteína do gel para a membrana.

Trate a membrana com um fixador para reter a proteína na membrana e depois lave.

Incube com uma solução de bloqueio contendo anticorpos primários e inibidores da fosfatase para manter a fosforilação da alfa-sinucleína.

Os anticorpos interagem exclusivamente com a alfa-sinucleína fosforilada e os reagentes bloqueadores bloqueiam locais de interação inespecíficos e depois são lavados.

Introduza anticorpos secundários conjugados com enzimas que interagem com anticorpos primários e, em seguida, lave.

Adicione um substrato quimioluminescente, interagindo com enzimas e gerando uma quimioluminescência.

Uma banda quimioluminescente confirma a presença de alfa-sinucleína fosforilada.

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Última atualização: 22 agosto 2026