JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 1:22 min • March 4th, 2025
Pegue o homogeneizado de tecido de um cérebro de mamífero que contém proteínas príon normais e agregados de príons mal dobrados responsáveis por doenças neurodegenerativas.
Incubar com uma enzima proteolítica para digerir os príons normais, deixando intactos os agregados resistentes.
Trate os agregados com um tampão desnaturante a alta temperatura para linearizar as proteínas e transmitir uma carga negativa uniforme.
Carregue a amostra em um gel de eletroforese e separe as proteínas em bandas, o que confirma a presença de agregados.
Usando um campo elétrico, transfira as proteínas separadas para uma membrana.
Incube a membrana em uma solução de bloqueio para mascarar locais de ligação não específicos.
Incubar com anticorpos marcados com a enzima peroxidase, que se ligam especificamente aos agregados de príons.
Lave a membrana para remover anticorpos não ligados, minimizando sinais inespecíficos.
Adicione um substrato quimioluminescente e um agente oxidante, permitindo que a peroxidase oxide o substrato e produza luz.
Meça a intensidade da luz para quantificar príons mal dobrados no homogeneizado.