Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:23 min. • March 4th, 2025
Pegue uma seção reidratada de tecido cerebral humano doente contendo corpos de Lewy, ou LBs.
Incubar com solução de peróxido de hidrogênio para inibir as peroxidases endógenas e evitar manchas inespecíficas.
Aqueça a seção em tampão citrato para desmascarar os epítopos de alfa-sinucleína nos LBs.
Aplique um agente bloqueador para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Remova o excesso de agente bloqueador e incube a seção com anticorpos primários direcionados à alfa-sinucleína.
Lave os anticorpos não ligados.
Aplique anticorpos secundários biotinilados que se ligam aos anticorpos primários.
Remova o excesso de anticorpos.
Adicione complexos estreptavidina-biotina-peroxidase, que se ligam aos anticorpos secundários biotinilados.
Lave os complexos não ligados.
Aplique um substrato produtor de cor que reaja com a peroxidase, formando precipitados marrons.
Remova o excesso de substrato.
Trate com uma contracoloração para colorir os núcleos de azul, aumentando o contraste contra a alfa-sinucleína corada de marrom dentro dos LBs no citoplasma neuronal sob um microscópio.