Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:27 min. • March 4th, 2025
Isole o nervo óptico de camundongos transgênicos com lesões cerebrais em intervalos definidos após a lesão. O nervo contém neurônios que expressam uma proteína fluorescente.
Usando microscopia de fluorescência, visualize o nervo lesado, que exibe um aumento progressivo de inchaços e desconexões axonais.
Fixe o tecido para preservar as estruturas celulares.
Enxágue o lenço de papel para remover o excesso de fixador.
Trate com uma solução de ferrocianeto de ósmio que se liga aos lipídios da bainha de mielina e aumenta o contraste para a imagem.
Enxágue o tecido e incube em um composto de metal pesado que se liga às macromoléculas e aumenta o contraste.
Desidrate o tecido usando concentrações crescentes de álcool e incorpore em uma resina.
Obtenha cortes transversais e longitudinais e trate-os com compostos de metais pesados, melhorando o contraste.
Sob um microscópio eletrônico, as seções longitudinais revelam um desenvolvimento progressivo de inchaços axonais com mitocôndrias inchadas acumuladas, vesículas, bolhas de membrana e estruturas citoesqueléticas interrompidas.
As seções transversais mostram uma ruptura progressiva das bainhas de mielina, indicando degeneração axonal.