Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:29 min. • March 4th, 2025
Comece com uma fatia de cérebro rica em neurônios dopaminérgicos.
Incube a fatia em aCSF contendo falsos neurotransmissores fluorescentes ou FFNs.
Os FFNs são marcadores sensíveis ao pH que imitam a dopamina e fluorescem mais intensamente em ambientes neutros do que ácidos.
Esses FFNs entram seletivamente nos neurônios dopaminérgicos e são carregados em vesículas sinápticas ácidas, onde a mudança de pH reduz a fluorescência do FFN.
Transfira esta fatia para uma câmara de imagem, prenda-a e perfunda continuamente com aCSF para remover FFNs não ligados.
Visualize a fatia para confirmar o acúmulo de FFN como ponto fluorescente.
Em seguida, posicione um eletrodo estimulante para fornecer estimulação elétrica.
Os pulsos elétricos fazem com que o cálcio entre no neurônio, levando à fusão da vesícula sináptica com a membrana neuronal e à liberação de FFNs na fenda sináptica extracelular.
No ambiente de pH neutro da fenda sináptica, a fluorescência FFN se intensifica.
Visualize a fatia novamente para observar a fluorescência difusa no espaço extracelular, confirmando a liberação de FFN das vesículas sinápticas.