JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 1:28 min • March 4th, 2025
Comece com o líquido cefalorraquidiano, ou LCR, coletado de indivíduos de várias idades.
Centrifugue a amostra para granular detritos celulares e colete o sobrenadante.
O sobrenadante contém proteínas envolvidas na geração de neurônios ou neurogênese.
Pegue uma placa multipoços revestida com estreptavidina. Adicione um agente de bloqueio para evitar a associação não específica.
Adicione anticorpos de captura marcados com biotina seletivos às proteínas específicas relacionadas à neurogênese.
Incube com agitação para ligar os anticorpos à estreptavidina e, em seguida, lave a placa.
Adicione a amostra de LCR junto com anticorpos de detecção marcados com rutênio aos poços e incube com agitação.
As proteínas específicas relacionadas à neurogênese se ligam para capturar anticorpos e interagir com anticorpos de detecção simultaneamente.
Lave bem a placa e adicione um tampão de detecção.
Coloque a placa em um sistema de imagem.
O buffer de detecção aciona a emissão de luz do rutênio.
Uma diminuição na intensidade da luz nas amostras indica reduções relacionadas à idade nos níveis de proteína relacionados à neurogênese, confirmando um declínio na neurogênese.