JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 1:29 min • March 4th, 2025
Comece com uma co-cultura de astrócitos e diferenciação de agregados de células-tronco neuronais em meios de diferenciação.
Os astrócitos secretam moléculas de sinalização que aumentam a maturação e a diferenciação das células-tronco em neurônios e astrócitos.
Em seguida, adicione um fixador para preservar a estrutura celular, seguido de lavagem.
Adicione uma solução detergente para permeabilizar as membranas celulares e lave.
Introduza um reagente de bloqueio para bloquear locais de ligação inespecíficos.
Adicione anticorpos primários que se ligam especificamente a marcadores proteicos de neurônios e astrócitos maduros. Lave para remover anticorpos não ligados.
Em seguida, adicione anticorpos secundários marcados com fluorescência verde e vermelho e incuba. Esses anticorpos se ligam aos respectivos anticorpos primários, fornecendo fluorescência distinta às células.
Introduza um corante nuclear para manchar os núcleos de azul.
Finalmente, observe as células usando um microscópio confocal.
Dentro dos agregados, as células fluorescentes verdes indicam neurônios maduros, enquanto as células fluorescentes vermelhas representam os astrócitos. Isso confirma as interações célula-célula na facilitação da maturação neuronal.