Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:23 min. • March 4th, 2025
Pegue um cérebro quimicamente fixado de um camundongo submetido a estresse crônico.
O estresse prejudica a função dos oligodendrócitos, interrompendo a bainha de mielina rica em lipídios que envolve os axônios neuronais no córtex pré-frontal medial, uma região do cérebro que regula a emoção.
Reaplique o fixador para preservar a arquitetura do tecido. Mergulhe o tecido em um crioprotetor para substituir a água, evitando a formação de cristais de gelo durante o congelamento.
Congele o cérebro e divida-o em fatias coronais.
Monte as fatias em lâminas e reidrate-as em água para aumentar a penetração da mancha.
Aqueça as fatias em uma solução contendo íons de ouro. Esses íons se ligam seletivamente aos lipídios na bainha de mielina e formam depósitos metálicos de ouro, marcando os neurônios mielinizados.
Aqueça com um agente redutor para reduzir o excesso de íons de ouro, depois enxágue para removê-los e desidrate o tecido usando concentrações crescentes de álcool.
Use xileno para aumentar a transparência do tecido e montar as lâminas.
Usando microscopia, visualize os neurônios mielinizados manchados de ouro e avalie as alterações induzidas pelo estresse.